ИНСТРУКЦИИ

относно използването на набор от реагенти за колориметрично определяне на протеин в урината и цереброспиналната течност с пирогалол червен t

Комплектът включва:

200 ml (2 х 100 ml P + 2 x 2 ml калибратор)

500 ml (2 х 250 ml P + 2 x 5 ml калибратор)

Принцип на метода

Когато протеин взаимодейства с пирогалол червено и

натриев молибдат образува оцветен комплекс,

интензивността на цвета е пропорционална на концентрацията

Съдържание на комплекта

Реагент (Р) - пирогалолов червен разтвор в сукцинат

буфер, готов за употреба.

Калибратори - Ниско калибриращи протеинови разтвори (0.20

g / l, използвани за определяне на микропротеинурия) и висока

(0,50 g / l, използван за определяне на протеинурия)

концентрация на протеин, съдържаща 70% албумин и 30%

глобулин готов за употреба.

Комплект за съхранение - при температура от 2-8 ° C в опаковка

производител за целия срок на годност.

Стабилност на реагент и калибратори

След отваряне реагентът е стабилен за 6 месеца, калибратори - 3 месеца. когато се съхранява в плътно затворена форма при температура 2-8 ° C на тъмно място.

Нормални стойности

• урина - до 0.120 g / l (до 0.141 g / ден);
• цереброспинална течност (CSF) - 0.150-0.450 g / l.

Проби за анализ

Урина, нехемолизиран CSF.

Подготовка за анализ

1. CSF и урина се центрофугират за 10 min при 2700-4000 rpm.
2. Използвайте чисти, добре измити тръби за анализ. Изпитването за пригодност на епруветките за анализ е отсъствието на промяна в цвета на реагента. Ако реагентът стане син без добавяне на проба, резултатите от определянето на протеина ще бъдат надценени; затова първо разпръснете реагента и след това добавете урина.
3. При въвеждането на метода трябва да се използват нови кювети, тъй като те не се оцветяват с реагента и реакционната проба. Старите пластмасови кювети (мътни, непрозрачни) не са подходящи за измерване. Преди употреба третирайте използваните кювети, както следва: оставете за 10 минути в промивния разтвор (200 ml 5% разтвор на водороден пероксид или 1 ml детергент), след това изплакнете с чешма и дестилирана вода поне 10 пъти. Комплектът е подходящ за анализ на биохимични полуавтоматични и автоматични анализатори.

Анализ на дължината на вълната: 598 (578-620) nm; дължина на оптичния път: 10 mm; температура: 18-25 ° С.

Реагентът и калибраторът трябва да се държат при стайна температура за около 30 минути преди анализа.

Процедура 1 (определяне на протеинурия)

Пробите за смесване се държат в продължение на 10 минути при стайна температура (18-25 ° С). Измерва се оптичната плътност на експерименталните (E) и калибриращите (EC) проби спрямо контролната (празна) проба. Цветът е стабилен за 1 час.

КАКВО ИЗМЕРВАМЕ В МЕТОДА НА СУФОСАЛИЦИЛ НА УРИНА?

В нашата страна, турбидиметричен метод, използващ сулфосалицилова киселина (сулфосалицилен метод), който за първи път беше предложен от Kingsbury F, се използва главно за определяне на протеиновата концентрация в урината. Б. В същото време лабораториите на развитите страни практически не използват този метод, в резултат на което лабораторният качествен контрол на анализа на протеини в урината показва намаляване на коефициента на вариация. Така през 1993 г. 60% от френските клинични диагностични лаборатории са извършили определянето на концентрацията на протеин в урината чрез колориметричен метод, като са използвали пирогалово червено багрило (пирогалолов метод) и само 10% използвали сулфосалициловия метод. Диагностични комплекти за определяне на протеини в урината на базата на метода пирогалол се произвеждат от такива добре познати компании като Bayer D iagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. За съжаление в нашата страна, по икономически причини и отчасти поради липса на опит, колориметричните методи за определяне на белтъка в урината все още са много малко използвани.

Възниква въпросът - доколко е оправдан отказът на лабораториите в развитите страни да използват простия и най-вече евтиния метод. За да се изясни този въпрос, сравнихме резултатите от определянето на протеиновата концентрация в урината на пациентите по два метода: сулфосалицилова [1] и пирогалолова [2].

Процедурата за измерване на концентрацията на протеин с всеки метод е както следва.

Реагенти: 3% разтвор на сулфосалицилова киселина, 0,9% разтвор на натриев хлорид,

Калибратор (калибрационен разтвор на серумен албумин, 50 g / l, в разтвор на натриев хлорид, 0,9% и натриев азид, 0,095%) от комплект "Uni-Test - Total Protein", произведен от “Diakon DS” по поръчка на “A / За Унимед ”.

Оборудване: спектрофотометър SF-2000, произведен от ОКБ „Спектр”.

Курс на измерване: 0.5 ml от филтрираната урина и 1.5 ml 3% разтвор на сулфосалицилова киселина се добавят към кварцова кювета с дължина на оптичния път 1 cm и се разбърква. След 10 min оптичната плътност се измерва на спектрофотометър при дължина на вълната 595 nm срещу празна проба (кювета с 0,5 ml урина и 1,5 ml 0,9% разтвор на натриев хлорид). Изчисляването на протеиновата концентрация се извършва съгласно калибрационния график. За неговото изграждане, разреждания на стандартен разтвор на човешки серумен албумин в 0.9% разтвор на натриев хлорид с концентрации: 0.025; 0.05; 0.1; 0.2; 0.3; 0.4; 0,5; 0.6; 0.7; 0.8; 0.9 g / l. За всеки от приготвените разтвори, измерването се извършва по същия начин, както с пробата за урина. Графиката за калибриране е показана на фиг.1.

Фиг. 1. Калибровъчна крива за определяне на протеин в урината чрез сулфосалицилов метод.

Използван е търговски комплект, произведен от Biocon Diagnostik (Германия) - Fluitest USP-Protein, ултра-чувствителен метод, базиран на червения пирогалол-молибдат комплекс.

Реагенти: пирогалол червено, 0.06 mmol / 1, натриев молибдат, 0.04 mmol / 1, сукцинатен буфер 50 mmol / 1, рН 2.5, детергенти 2%; Калибратор (калибрационен разтвор на серумен албумин, 50 g / l, в разтвор на натриев хлорид, 0,9% и натриев азид, 0,095%) от комплект "Uni-Test - Total Protein", произведен от “Diakon DS” по поръчка на “A / За Унимед ”. [3].

Оборудване: биохимичен фотометър StatFax 1904 Plus (“Awareness Technology inc.”, САЩ).

Калибровъчната крива за описания метод със съотношението проба / реагент - 1 / 12,5 се получава при използване на специално приготвени разтвори на серумен албумин: 0.05; 0.4; 0,5; 0.6; 0.7; 0.8; 0.9; 1,0 g / l чрез разреждане на калибратора (50 g / l) с 0,9% разтвор на натриев хлорид (фиг.2).

Фиг. 2. Калибровъчна крива за пирогалолов червен метод, реактив Fluitest USP, Biocon Diagnostik (Германия) със съотношение проба / реагент 1 / 12.5.

80 μl бяха взети от всеки протеинов разтвор и смесени с 1.0 ml реагент; измерени като уринни проби.

Фиг. 3. Диаграма на съпоставимостта на резултатите от измерването на протеиновото съдържание в урината чрез сулфосалицилова и пирогалолова методика.

Калибровъчната крива за реагента, произведена от Unimed A / O и Biocon Diagnostik, със съотношение проба / реагент от 1/30, се получава с помощта на специално приготвени разтвори на серумен албумин: 0.05; 0.4; 0,5; 0.6; 0.7; 0.8; 0.9; 1.0, 1.1; 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6; 1.7; 1,75; 1.8; 1,85; 1.9; 2,0 g / l чрез разреждане на калибратора (50 g / l) с 0,9% разтвор на натриев хлорид (Фиг.4).

Фиг. 4. Калибровъчни криви за Unimed A / O реагент (горна графика) и Fluitest USP комплект от Biocon Diagnostik (долна графика) със съотношение проба / реагент от 1/30.

От всеки протеинов разтвор се вземат 50 μl и се смесват с 1,5 ml реагент и се измерват като урина.

В проучването, за да се постигне максимална чувствителност на пирогалоловия метод, се използва модифицираният му високочувствителен вариант. За това се увеличава обемът на добавената урина. Курс на измерване: 1 ml от основния реагент се добавя към всички епруветки, след това към първата епруветка се добавят 80 μl дестилирана вода (празна), към останалите епруветки се добавят 80 μl центрофугирана урина, инкубират се при стайна температура в продължение на 10 минути и се измерва оптичната плътност на пробата спрямо празната проба 600 nm дължина на вълната и 650 nm диференциален филтър

За сравнение на методите за определяне на концентрацията на протеин в урината, 60 проби от урината на пациентите са измерени чрез сулфосалицилови и пирогалолови методи.

Чувствителността на методите за измерване на протеин в урината се оценява чрез изследване на приготвени водни разтвори на урина, съдържащи ниски концентрации на серумен албумин (от 0 до 0.05 g / l). За пирогалол и сулфосалицилови методи, ние също изследвахме стойностите на неспецифична абсорбция, дължаща се на цвета на пробата урина. За това се измерва оптичната плътност на пробите от урина, в която вместо сулфосалицилова киселина или пирогалолов реактив се добавя еквивалентно количество физиологичен разтвор.

За оценка на ефекта на матрицата (урината) върху резултатите от сулфосалициловия метод бяха проведени следните експерименти.

1) В проби от урина, които не съдържат протеин, съгласно пирогалол и сулфосалицилови методи (п = 43), се добавя човешки серумен албумин при крайна концентрация от 0,4 г / л. След това, като се използват горните методи, се определя концентрацията на протеин в приготвените проби.

2) Пробите от урина (п = 16), имащи протеин съгласно метода на пирогалол, бяха разредени два пъти с 0.9% разтвор на натриев хлорид. Получените проби се преразглеждат по метода на сулфосалицила, като концентрацията на протеина се преизчислява за разреждане.

Резултати от изследвания и дискусия

Проучване на проби от урина, съдържащи специфични концентрации на албумин, показа, че минималната концентрация на албумина (чувствителност на метода) е 0,033 g / l за сулфосалициловия метод и 0,012 g / l за пирогалолния метод.

Резултатите от измерванията под формата на диаграма на съпоставимостта на резултатите от измерването на протеиновото съдържание в уринни проби с методите на сулфосалициловата (ординатната ос) и пирогалола (ос на абсцисите) са показани на фиг. 3. Твърдата наклонена линия на графиката съответства на равенството на резултатите от измерването по два метода. Ако и двата метода дават подобни стойности, тогава точките на графиката трябва да бъдат групирани в близост до твърдата линия. Данните, показани на фиг. 3, можем също да отбележим, че сулфосалициловия метод последователно показва по-ниски протеинови концентрации във всички проби на урината в сравнение с пирогалоловия метод.

Както показва изследването, между резултатите, получени при използване на сулфосалицилови и пирогалолови методи, няма убедителна статистическа връзка. Освен това, в сравнение с метода на пирогалол, сулфосалициловия метод в 95% от пробите от урина показва по-ниски стойности на протеинова концентрация. В същото време, в 86% от случаите, измерването по метода на сулфосалицила дава подценени резултати с два или повече пъти в сравнение с метода на пирогалола.

В същото време сулфосалициловия метод в някои случаи показва наличието на протеин в пробата поради тъмния цвят или увеличената мътност на изследваната урина. Установено е, че при определяне на протеина чрез сулфосалициловия метод (съотношение проба / реактив = 1/3) при дължина на вълната 595 nm, приносът на пробата от урина поради неговия цвят или мътност до резултата може да бъде от 0 до 0,247 g / l (средна стойност - 0,031 g / 1). Следователно, трябва да се признае, че при използване на сулфосалициловия метод, използването на контролна проба (проба от урина + физиологичен разтвор) за всяка проба от урина е задължително. При определяне на протеина по метода на пирогалола, цветът или степента на мътност на пробата от урина не оказват влияние върху резултата.

Експериментът за оценка на ефекта на матрицата (урината) показва, че в почти всички приготвени проби от урина, съдържащи 0.4 g / l албумин, концентрацията му, определена по метода сулфо-салицилова, е под 0.4 g / l средно с 20% (гранични стойности) концентрация на протеин 0,29-0,34 g / l). В същото време, когато се измерва концентрацията на протеини в тези проби с метода на пирогалола, резултатите за всички проби са в диапазона 0,40-0,46 g / l. Също така, при оценката на ефекта на матрицата (урината) върху резултатите от измерването на протеиновата концентрация чрез сулфосалициловия метод, беше установено, че в 5 от 16 двойно разредени уринни проби концентрацията на протеин е 15–33% по-висока, отколкото в съответните неразредени проби. За окончателното изясняване на ефекта на матрицата върху резултатите от сулфосалициловия метод е необходимо изследване на голям брой проби от урина.

Така получените данни показват предимствата на метода на пирогалола над сулфосалициловия метод поради по-високата му чувствителност и нечувствителност към интерфериращи фактори, не е необходима празна проба от урина, възможността за използване на един стандарт за конструиране на калибрационна крива и малко количество урина за анализ. Наличието на такива характеристики ни позволява да препоръчаме метода на пирогалол за широко приложение в лабораторната практика.

От получените данни следва заключение: резултатите от измерването на концентрацията на протеин в урината по метода на сулфосалицила не са сравними с резултатите, получени по метода на пирогалола. Този факт е отговор на въпроса - защо лабораториите в развитите страни не използват сулфосалициловия метод. Прилагането на този метод в слаборазвитите страни очевидно се обяснява с факта, че ценовият фактор преобладава над точността и диагностичната значимост на получените резултати и, предвид представените на фиг. 3 резултати, може да се каже, и над здравия разум. Кой се нуждае от такъв анализ, когато при концентрация на протеин в урината от 0,3 g / l, резултатът от измерването може да бъде от 0,05 до 0,25 g / l? Колкото до ценовия фактор, тогава, както знаете, скъперникът плаща два пъти. Погрешните резултати от анализа водят до погрешна диагноза и неефективно лечение на пациента. Основната опасност от използването на сулфосалициловия метод е, че получаваме значително подценени стойности и рядко пропускаме протеинурия. Следователно, този метод не може да се приложи дори за скрининг.

И така, какво измерваме със сулфосалициловия метод? Методът принадлежи към класа на турбидиметричния, базиран на измерване на промяната в пропускането на светлина (DD) на реакционната смес в резултат на разсейване на светлината (мътност). В случая на откриване на протеин в урината се образува мътност поради следния процес: денатурират се молекулите на белтъците на урината в кисела среда, преминавайки от компактна кълбовидна форма към хлабава “нишковидна” форма. В същото време способността на образуването на конгломерати рязко се увеличава (реакция на утаяване) в протеините. Отделните протеинови молекули са по-малки от дължината на вълната на видимата светлина и затова много слабо я разпръскват. Ефективността на разсейване нараства драматично, когато размерът на получените конгломерати на протеиновите молекули достигне стойност от 0.6 μm (дължината на вълната на пробната светлина). Колкото по-голяма е концентрацията на протеин в урината, толкова по-голям е броят на тези конгломерати (центрове за разсейване). Въпреки това, връзката между оптичната плътност D D, измерена на фотометър, и концентрацията на протеин в урината е много сложна. В началния етап на реакцията се образува определено количество малки протеинови частици, след което те започват да се слепват в по-големи частици, докато концентрацията на разсейващите центрове намалява, а ефективността (напречното сечение) на разсейването на всеки център се увеличава. Във всеки един момент имаме в реакционната смес определен брой разсейващи центрове с различни размери. При високи концентрации на протеин в урината могат да се образуват големи протеинови частици, които се утаяват, което води до намаляване на оптичната плътност на реакционната смес.

Процесът на денатурация на протеините и реакцията на утаяване зависят от състава на средата, в която се срещат (рН, концентрация на различни соли). За калибриране на метода използваме воден разтвор на човешки албумин с добавяне на 0.9% натриев хлорид. Когато измерваме концентрацията на протеин в урината, не знаем и не вземаме под внимание нито рН на урината, нито неговия състав на сол. Ние също не вземаме под внимание факта, че различните протеини реагират по различен начин в разтвора на сулфосалициловата киселина. Това обяснява големия размах на резултатите от измерванията, представени на фиг. 3. Колкото по-близо е съставът на урината към състава на калибратора, толкова по-точен е резултатът от измерването. Въпреки това, има много малко такива проби урина. В повечето случаи съставът на урината е такъв, че резултатите от измерването са подценени и често доста значими.

Последното се потвърждава от описания по-горе експеримент, в който концентрацията на протеин се измерва чрез сулфосалициловия метод в неразредени и двойно разредени проби от урина. Сравнението на получените данни показва, че разреждането на урината (като се вземе предвид степента на разреждане) води до увеличаване на резултатите от измерванията на концентрацията на протеини с 15-33%. Този факт потвърждава значителното влияние на състава на урината върху резултата от определянето на концентрацията на протеин (матричен ефект).

Защо пироголол метод позволява да се получат по-точни резултати от измерването на концентрацията на протеин в урината? Първо, поради по-голямата кратност на разреждане на пробите от урина в реакционната смес. Ако в сулфосалициловия метод съотношението проба / реагент на урината е 1/3, то при пирогалолния метод то може да бъде в диапазона от 1 / 12,5 до 1/60, в зависимост от варианта на техниката, което значително намалява ефекта на състава на урината върху резултата от измерването. Второ, реакцията протича в сукцинатен буфер, т.е. при стабилно рН. И накрая, самият принцип на метода, ако може да се каже, е по-прозрачен. Натриевият молибдат и пирогаловото червено багрило образуват комплекс с протеинова молекула. Това води до факта, че молекулите на багрилото, в свободно състояние, не абсорбират светлина при дължина на вълната от 600 nm, в комбинация с протеин, абсорбират светлината. По този начин, изглежда, че маркираме всяка протеинова молекула с багрило и в резултат на това откриваме, че промяната в оптичната плътност на реакционната смес при дължина на вълната от 600 nm е уникално свързана с концентрацията на протеин в урината.

Като заключение, най-значимите разлики между сулфосалициловия метод за определяне на протеина в урината и метода, използващ пирогалово червено багрило, са представени в Таблица №1.

Tab. № 1. Сравнителни характеристики на два метода за определяне на протеин в урината (сулфосалицилова и пирогалолова методи)

Определяне на протеини в урината с пирогалол червено

Принципът на метода се основава на фотометрично измерване на оптичната плътност на разтвор на оцветен комплекс, образуван от взаимодействието на протеинови молекули с молекулите на пирогаловия червен багрилен комплекс и натриев молибдат (Pyrogallol Red-Molybdate complex) в кисела среда. Интензивността на цвета на разтвора е пропорционална на съдържанието на протеин в изследвания материал. Наличието на детергенти в реактива осигурява еквивалентно определение на протеини с различно естество и структура.

Реагенти. 1) 1,5 mmol / l разтвор на пирогалол червено (PGA): 60 mg PGA се разтварят в 100 ml метанол. Да се ​​съхранява при температура 0–5 ° С; 2) 50 mmol / 1 сукцинатен буферен разтвор рН 2.5: 5.9 g янтарна киселина (HOOC-CH₂СН₂-СООН); 0.14 g натриев оксалат (Na₂C₂О₄) и 0,5 g натриев бензоат (С₆Н₅COONa) се разтваря в 900 ml дестилирана вода; 3) 10 mmol / l разтвор на натриев молибдат кристалхидрат (Na₂МоОз₄ Х 2Н₂О): 240 mg натриев молибдат се разтварят в 100 ml дестилирана вода; 4) Работен реактив: към 900 ml сукцинатен буферен разтвор се добавят 40 ml от разтвора на ПХК и 4 ml разтвор на натриев молибдат. РН на разтвора се нагласява на 2,5 с 0,1 mol / l разтвор на солна киселина (HCl) и неговият обем се регулира до 1 1. Реагентът в тази форма е готов за употреба и е стабилен, когато се съхранява на тъмно и при температура 2–25 ° C в продължение на 6 месеца; 5) 0,5 g / l стандартен разтвор на албумин.

Курсът на определяне. 0.05 ml от изследваната урина се въвеждат в първата епруветка, 0,05 ml стандартен разтвор на албумин се добавят към втората епруветка и 0,05 ml дестилирана вода към третата епруветка (контролна проба), след което към тези епруветки се добавят 3 ml работен реагент. Съдържанието на епруветките се смесва и след 10 минути пробата и стандартът се фотометрират срещу контролна проба при дължина на вълната 596 nm в кювета с дължина на оптичния път 10 mm.

Изчисляването на концентрацията на протеин в анализираната проба от урина се извършва по формулата:

където С е концентрацията на протеин в анализираната проба от урина, g / l; А_{и т.н.} и a_статия- екстинкция на изследваната проба от урина и стандартен разтвор на албумин, g / l; 0.5 - концентрация на стандартен разтвор на албумин, g / l.

• цветът на разтвора (цветен комплекс) е стабилен за един час;
• пряко пропорционална връзка между концентрацията на протеин в пробата и абсорбцията на разтвора зависи от типа на фотометъра;
• когато съдържанието на протеин в урината е над 3 g / l, пробата се разрежда с изотоничен разтвор на натриев хлорид (9 g / l) и определянето се повтаря. Степента на разреждане се взема предвид при определяне на концентрацията на протеина.

Ние лекуваме черния дроб

Лечение, симптоми, лекарства

Пирогалово червено определяне на протеина в урината

26.02.2009

Куриляк О.А.

Обикновено протеинът се екскретира в урината в относително малко количество, обикновено не повече от 100-150 mg / ден.

Ежедневната диуреза при здрав човек е 1000-1500 ml / ден; по този начин, концентрацията на протеин при физиологични условия е 8-10 mg / dL (0.08–0.1 g / l).

Общият протеин на урината е представен от три основни фракции - албумин, мукопротеини и глобулини.

Албуминът в урината е частта от серумния албумин, която е филтрирана в гломерулите и не се реабсорбира в бъбречните тубули; в нормалната екскреция на албумин в урината е по-малко от 30 mg / ден. Друг основен източник на протеин в урината са бъбречните тубули, особено дисталната част на тубулите. Тези тубули отделят две трети от общото количество протеини в урината; от това количество приблизително 50% е представено от гликопротеина Tamm-Horsfall, който се секретира от епитела на дисталните тубули и играе важна роля в образуването на уринарни камъни. Други протеини присъстват в урината в малки количества и идват от нискомолекулни плазмени протеини, филтрирани през бъбречния филтър, които не се абсорбират в бъбречните тубули, микроглобулини от епитела на бъбречните тубули (RTE), както и простатни и вагинални секрети.

Протеинурия, т.е. увеличаване на съдържанието на протеин в урината е един от най-значимите симптоми, отразяващи увреждането на бъбреците. Въпреки това, редица други състояния могат да бъдат придружени от протеинурия. Следователно има две основни групи протеинурия: бъбречна (истинска) и екстрареална (невярна) протеинурия.

При бъбречната протеинурия протеинът влиза в урината директно от кръвта, поради увеличаване на пропускливостта на гломерулния филтър. Бъбречната протеинурия често се среща при гломерулонефрит, нефроза, пиелонефрит, нефросклероза, бъбречна амилоидоза, различни форми на нефропатия, например нефропатия при бременни жени, треска, хипертония и др. Протеинурия може да се открие и при здрави хора след тежко физическо натоварване, хипотермия и психологически стрес. При новородените се наблюдава физиологична протеинурия през първите седмици от живота и когато астения се наблюдава при деца и юноши, ортостатичната протеинурия (в изправено положение на тялото) е възможна в комбинация с бърз растеж на възраст между 7 и 18 години.

В случай на фалшива (екстрареална) протеинурия, източникът на протеин в урината е примес на левкоцити, еритроцити, епителни клетки на уреята на пикочните пътища. Разпадането на тези елементи, особено изразено с алкална урина, води до проникване на протеин в урината, която вече е преминала през бъбречния филтър. Особено висока степен на фалшива протеинурия дава кръв в урината, с обилна хематурия, тя може да достигне 30 g / l и повече. Заболявания, които могат да бъдат придружени от екстрареална протеинурия - уролитиаза, туберкулоза в бъбреците, тумори на бъбреците или пикочните пътища, цистит, пиелит, простатит, уретрит, вулвовагинит.

Клиничната класификация включва лека протеинурия (по-малко от 0,5 g / ден), умерена (от 0,5 до 4 g / ден), или тежка (повече от 4 g / ден).

Повечето пациенти с бъбречно заболяване, като остър гломерулонефрит или пиелонефрит, показват умерена протеинурия, но пациентите с нефротичен синдром обикновено отделят повече от 4 g протеин дневно.

За количественото определяне на протеини се използва широк спектър от методи, по-специално унифицирания метод на Brandberg-Roberts-Stolnikov, биуретния метод, метода на сулфосалициловата киселина, методите, използващи синьото багрило Coomassie, пирогалово червено багрило и др.

Използването на различни методи за определяне на протеина в урината е довело до сериозно объркване в интерпретацията на границите на нормата на протеиновото съдържание в урината. Тъй като в лабораториите най-често се използват 2 метода - със сулфосалицилова киселина и пирогалолова червена боя, разглеждаме проблема за коректността на границите на нормите за тях. От гледна точка на сулфосалициловия метод при нормална урина, съдържанието на протеини не трябва да надвишава 0,03 г / л, а от гледна точка на пирогалола - 0,1 г / л! Разликите са трикратни.

Ниски стойности на нормалната концентрация на протеини в урината при използване на сулфосалицилово поради следните точки:

• калибровъчната крива се основава на воден разтвор на албумин. Урината в неговия състав е много различна от водата: рН, сол, съединения с ниско молекулно тегло (креатинин, урея и др.). В резултат на това, според Алтшулер, Раков и Ткачев, грешка при определяне на протеина в урината може да бъде 3 пъти или повече! Т.е. правилните резултати могат да бъдат получени само в случаите, когато урината има много ниско специфично тегло и нейният състав и рН достигат вода;
• по-високата чувствителност на сулфосалициловия метод към албумина в сравнение с други протеини (по това време, както бе споменато по-горе, албуминът в нормалните проби от урината не е повече от 30% от общия протеин на урината);
• ако рН на урината се измести към алкалната страна, сулфосалициловата киселина се неутрализира, което също води до намаляване на резултатите от определянето на протеина;
• скоростта на утаяване на утайките е подложена на значителни вариации - при ниски концентрации на протеин, утаяването се забавя, а ранното прекратяване на реакцията води до подценяване на резултата;
• скоростта на утаяване по същество зависи от смесването на реакционната смес. При високи концентрации на протеин енергичното разклащане на тръбата може да доведе до образуването на големи люспи и бързото им утаяване.

Всички изброени по-горе характеристики на метода водят до значително подценяване на концентрацията на протеини, определена в урината. Степента на недостатъчно отчитане силно зависи от състава на определена проба урина. Тъй като методът на сулфосалициловата киселина дава подценена стойност на протеиновата концентрация, нормалната граница за този метод е 0,03 g / l, също около три пъти прекалено ниска в сравнение с данните, дадени в чуждестранни справочници по клинична лабораторна диагностика.

По-голямата част от лабораториите в западните страни са се отказали от използването на сулфосалициловия метод за определяне на концентрацията на протеин в урината и активно използват метода пирогалол за тази цел. Пирогалолният метод за определяне на протеиновата концентрация в урината и други биологични течности се основава на фотометричния принцип за измерване на оптичната плътност на оцветен комплекс, образуван от взаимодействието на протеинови молекули с пирогалово червено багрило и комплекс от молекули натриев молибдат (Pyrogallol Red - Молибдат комплекс).

Защо пироголол метод позволява да се получат по-точни резултати от измерването на концентрацията на протеин в урината? Първо, поради по-голямата кратност на разреждане на пробите от урина в реакционната смес. Ако в сулфосалициловия метод съотношението проба / реагент на урината е 1/3, то при пирогалолния метод то може да бъде в диапазона от 1 / 12,5 до 1/60, в зависимост от варианта на техниката, което значително намалява ефекта на състава на урината върху резултата от измерването. Второ, реакцията протича в сукцинатен буфер, т.е. при стабилно рН. И накрая, самият принцип на метода може да се каже, че е по-прозрачен. Натриевият молибдат и пирогаловото червено багрило образуват комплекс с протеинова молекула. Това води до факта, че молекулите на багрилото в свободно състояние, които не абсорбират светлина при дължина на вълната от 600 nm в комбинация с протеин, абсорбират светлината. По този начин, изглежда, че маркираме всяка протеинова молекула с багрило и, като резултат, виждаме, че промяната в оптичната плътност на реакционната смес при дължина на вълната от 600 nm ясно корелира с концентрацията на протеин в урината. Освен това, тъй като афинитетът на пирогалолово червено към различни протеинови фракции е почти еднакъв, методът позволява да се определи общият протеин на урината. Поради това, границата на нормалните стойности на протеиновата концентрация в урината е 0,1 g / l (това е посочено във всички съвременни западни насоки за клинична и лабораторна диагностика, включително Клиничното ръководство за лабораторни тестове, редактирано от N. Tits)., Сравнителните характеристики на пирогалола и сулфосалициловите методи за определяне на белтъка в урината са представени в Таблица 1.

В заключение бих искал отново да се съсредоточа върху факта, че когато лабораторията преминава от сулфосалициловия метод за определяне на белтъка на урината към пирогалолния метод, границата на нормалните стойности нараства значително (от 0.03 g / l до 0.1 g / l!). Този лабораторен персонал трябва да уведоми клиницистите, защото В тази ситуация диагнозата протеинурия може да се направи само в случаите, когато съдържанието на протеин в урината надвишава 0,1 g / l.

3. Определяне на протеин.

Принцип на метода на базата на коагулация на протеина в урината в присъствието на азотна (или 20% разтвор на сулфосалицилова) киселина.

Напредък в работата: към 5 капки урина добавете 1-2 капки азотна (или сулфосалицилова) киселина. В присъствието на протеин в урината се появява мътност.

Таблица. Откриване на патологични компоненти на урината.

Забележка: в присъствието на глюкоза и протеин в изследваната урина се определя количественото им съдържание.

Количествено определяне на протеин в урината по колориметричен метод с пирогалол червено.

Принцип на методаКогато протеин взаимодейства с пирогалол червено и натриев молибдат, се образува оцветен комплекс, интензивността на цвета, която е пропорционална на концентрацията на протеин в пробата.

реагенти: Работен реагент - разтвор на пирогалол червен в сукцинатен буфер, калибриращ протеинов разтвор с концентрация 0.50 g / l

Пробите се смесват, задържат се 10 минути. при стайна температура (18-25 ° С). Измерва се опитната оптична плътност (D_оп) и калибрираща проба (D_за) срещу контролната проба при X = 598 (578-610) nm. Оцветяването е стабилно за 1 час.

изчисление: концентрацията на протеин в урината (C) g / l се изчислява по формулата:

Нормални стойности: до 0.094 g / l, (0.141 g / ден)

Количествено определяне на глюкоза в урината чрез метода на глюкозооксидазата.

Принцип на метода: Когато D-глюкозата се окислява от атмосферния кислород под действието на глюкозна оксидаза, се образува еквимоларно количество водороден пероксид. Под действието на пероксидаза, водороден пероксид окислява хромогенните субстрати (смес от фенол и 4 аминоантипирин - 4ААР) с образуването на оцветен продукт. Интензивността на цвета е пропорционална на съдържанието на глюкоза.

2 N₂ох₂ + фенол + 4ААП оцветено съединение + 4Н₂ох

Напредък в работата1 ml от работния разтвор и 0,5 ml фосфатен буфер се въвеждат в две епруветки. Към първата епруветка се прибавят 0,02 ml урина и към втория се прибавят 0,02 ml калибратор (калибриране, стандартен разтвор на глюкоза, 10 mmol / l). Пробите се смесват, инкубират се в продължение на 15 минути при температура 37 ° С в термостат, а оптичната плътност се измерва чрез експериментална (D)_оп) и калибриране (D_за) проби срещу работния реагент при дължина на вълната 500-546 nm.

Съдържанието на глюкоза в дневната урина се определя от ммол / ден чрез умножаване на резултата, получен от обема на събраната урина на ден.

Забележка. Когато съдържанието на захар в урината е повече от 1%, трябва да се разрежда.

Понастоящем биохимичните лаборатории използват единен експресен метод за анализиране на урината за глюкоза с помощта на тест за глюкоза с реактивен глюкозен тест или използване на комбинирани тест ленти за рН, протеини, глюкоза, кетонни тела и кръв. Тест ленти, потопени в съд с урината за 1 секунда. и сравнете цвета на скалата.

Доктор Хепатит

лечение на черния дроб

Нормално протеин в пирогалловия метод на урината

Здравият човек произвежда 1,0-1,5 литра урина дневно. Съдържанието на протеин в него 8 ― 10 mg / dl е физиологично явление. Дневният прием на протеини в урината 100-150 mg не трябва да предизвиква подозрение. Глобулинът, мукопротеинът и албуминът съставляват общия протеин в урината. Голям отток на албумин показва нарушение на филтрационния процес в бъбреците и се нарича протеинурия или албуминурия.

На всяко вещество в урината се дава "здравословна" скорост, а ако индексът на протеините се колебае, това може да покаже патология на бъбреците.

Анализът на урината включва използването на първата (сутрешна) част или вземане на дневна проба. Последното е за предпочитане, за да се оцени нивото на протеинурия, тъй като съдържанието на протеин има изразени дневни флуктуации. Урината през деня се събира в един контейнер, измерва общия обем. За лаборатория, която провежда анализ на протеини в урината, е достатъчна стандартна проба (от 50 до 100 ml) от този контейнер, а останалата част не е необходима. За повече информация се провежда допълнителен тест върху Zimnitsky, който показва дали дневните индикатори за урина са нормални.

Обратно към съдържанието

Протеинът в урината е нормален при възрастни не трябва да надвишава 0,033 g / l. В същото време дневната норма не е по-висока от 0,05 g / l. За бременни жени, процентът на протеини в дневната урина е повече - 0,3 г / л., А сутрин урината е същата - 0,033 г / л. Стандартите на протеините се различават в общия анализ на урината и при деца: 0,036 g / l за сутрешната порция и 0,06 g / l дневно. Най-често лабораториите извършват анализ, използвайки два метода, които показват колко протеинови фракции се съдържат в урината. Горните нормални стойности са валидни за анализа, извършен със сулфосалицилова киселина. Ако се използва пирогалово червено багрило, стойностите ще бъдат три пъти по-различни.

Обратно към съдържанието

Причината за протеина в урината могат да бъдат патологични процеси в бъбреците:

• филтрация в бъбречните гломерули върви по грешен път;
• абсорбцията в протеиновите тубули е нарушена;
• Някои болести имат силно натоварване на бъбреците - когато протеинът в кръвта се повиши, бъбреците просто нямат време да го филтрират.

Останалите причини се считат за небъбречни. Така се развива функционалната албуминурия. Протеинът в анализа на урината се проявява при алергични реакции, епилепсия, сърдечна недостатъчност, левкемия, отравяне, миелом, химиотерапия, системни заболявания. Най-често този показател в анализите на пациентите ще бъде първата камбана на хипертонична болест.

Увеличаването на протеина в урината може да се дължи на фактори от непатологичен характер, поради което ще са необходими допълнителни анализи.

Количествените методи за определяне на протеина в урината дават грешки, затова се препоръчва да се извършат няколко анализа и след това да се използва формулата за изчисляване на правилната стойност. Съдържанието на белтък в урината се измерва в g / l или mg / l. Тези показатели на протеина позволяват да се определи нивото на протеинурия, да се предложи причина, да се оцени прогнозата и да се определи стратегията.

Обратно към съдържанието

За пълното функциониране на тялото е необходим постоянен обмен между кръвта и тъканите. Възможно е само ако има известно осмотично налягане в кръвоносните съдове. Протеините на кръвната плазма поддържат такова ниво на налягане, когато нискомолекулните вещества лесно преминават от средата с тяхната висока концентрация към средата с по-ниска концентрация. Загубата на протеинови молекули води до освобождаване на кръв от леглото в тъканта, което е изпълнено със силен оток. Това е проява на умерена и тежка протеинурия.

Началните стадии на албуминурията са асимптоматични. Пациентът обръща внимание само на проявите на основното заболяване, което е причина за протеина в урината.

Следата протеинурия се нарича повишаване на нивото на протеин в урината поради употребата на определени продукти.

Урината за анализ се събира в чист, обезмаслен контейнер. Преди събиране на тоалетната е показан перинеум, трябва да се измие със сапун и вода. На жените се препоръчва да затворят вагината с парче памук или тампон, така че вагиналното течение да не повлияе на резултата. В навечерието е по-добре да не се пие алкохол, минерална вода, кафе, пикантен, солен и храна, която придава на урината цвят (боровинки, цвекло). Силно физическо натоварване, продължително ходене, стрес, треска и изпотяване, прекомерна консумация на протеинови храни или лекарства, преди да се даде урина, провокират появата на протеин в анализа на урината на напълно здрав човек. Това допустимо явление се нарича следа протеинурия.

Обратно към съдържанието

Бъбречно заболяване, водещо до загуба на протеин:

• Амилоидоза. Нормалните клетки в бъбреците се заменят с амилоиди (комплекс протеин-захарид), което предпазва организма от нормална работа. В протеинурен стадий, амилоидите се отлагат в бъбречната тъкан, като разрушават нефрона и в резултат на това бъбречният филтър. Така че протеинът получава от кръвта в урината. Този етап може да продължи повече от 10 години.
• Диабетна нефропатия. Поради неправилен метаболизъм на въглехидрати и липиди, кръвоносните съдове, гломерулите и тубулите в бъбреците са унищожени. Протеинът в урината е първият признак на предсказано усложнение на диабета.
• Болести на възпалителния генезис - нефрит. Най-често пораженията засягат кръвоносните съдове, гломерулите и пикочолистната система, нарушавайки нормалния ход на филтрационната система.
• Гломерулонефритът в повечето случаи е с автоимунен характер. Пациентът се оплаква от намаляване на количеството на урината, болки в долната част на гърба и повишаване на налягането. За лечение на гломерулонефрит препоръчваме диета, режим и лекарствена терапия.
• Пиелонефрит. В острия период настъпва със симптоми на бактериална инфекция: втрисане, гадене, главоболие. Това е инфекциозно заболяване.
• Поликистозна бъбречна болест.

В здраво тяло, протеиновите молекули (и те са доста големи по размер) не са в състояние да преминат през филтрационната система на бъбреците. Ето защо, протеин в урината не трябва да бъде. Този показател е еднакъв както за мъжете, така и за жените. Ако анализът показва протеинурия, важно е да се консултирате с лекар по причини. Специалистът ще прецени колко е повишено нивото на протеина, дали има съпътстваща патология, как да се възстанови нормалното функциониране на организма. Според статистиката жените имат по-висок риск от урогенитални заболявания, отколкото мъжете.

Принцип на метода на базата на коагулация на протеина в урината в присъствието на азотна (или 20% разтвор на сулфосалицилова) киселина.

Напредък в работата: към 5 капки урина добавете 1-2 капки азотна (или сулфосалицилова) киселина. В присъствието на протеин в урината се появява мътност.

Таблица. Откриване на патологични компоненти на урината.

Забележка: в присъствието на глюкоза и протеин в изследваната урина се определя количественото им съдържание.

Принцип на методаКогато протеин взаимодейства с пирогалол червено и натриев молибдат, се образува оцветен комплекс, интензивността на цвета, която е пропорционална на концентрацията на протеин в пробата.

реагенти: Работен реагент - разтвор на пирогалол червен в сукцинатен буфер, калибриращ протеинов разтвор с концентрация 0.50 g / l

Пробите се смесват, задържат се 10 минути. при стайна температура (18-25 ° С). Измерва се оптичната плътност на експерименталната (Dop) и калибрираща проба (Dk) спрямо контролната проба при λ = 598 (578-610) nm. Оцветяването е стабилно за 1 час.

изчисление: концентрацията на протеин в урината (C) g / l се изчислява по формулата:

където: Dop = Dk = C = g / l.

Нормални стойности: до 0.094 g / l, (0.141 g / ден)

Принцип на метода: Когато D-глюкозата се окислява от атмосферния кислород под действието на глюкозна оксидаза, се образува еквимоларно количество водороден пероксид. Под действието на пероксидаза, водороден пероксид окислява хромогенните субстрати (смес от фенол и 4 аминоантипирин - 4ААР) с образуването на оцветен продукт. Интензивността на цвета е пропорционална на съдържанието на глюкоза.

Глюкоза + О2 + Н2О глюконолактон + Н202

2H2O2 + фенол + 4AAP оцветено съединение + 4H2O

Напредък в работата1 ml от работния разтвор и 0,5 ml фосфатен буфер се въвеждат в две епруветки. Към първата епруветка се прибавят 0,02 ml урина и към втория се прибавят 0,02 ml калибратор (калибриране, стандартен разтвор на глюкоза, 10 mmol / l). Пробите се смесват, инкубират се в продължение на 15 минути при температура 37 ° С в термостат и се измерва оптичната плътност на експерименталните (Dop) и калибриращи (Dk) проби срещу работния реагент при дължина на вълната 500-546 nm.

Изчисление: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Съдържанието на глюкоза в дневната урина се определя от ммол / ден чрез умножаване на резултата, получен от обема на събраната урина на ден.

Забележка. Когато съдържанието на захар в урината е повече от 1%, трябва да се разрежда.

Понастоящем биохимичните лаборатории използват единен експресен метод за анализиране на урината за глюкоза с помощта на тест за глюкоза с реактивен глюкозен тест или използване на комбинирани тест ленти за рН, протеини, глюкоза, кетонни тела и кръв. Тест ленти, потопени в съд с урината за 1 секунда. и сравнете цвета на скалата.

Определяне на протеин с помощта на пирогалолов червен индикатор

Принципът на метода се основава на фотометрично измерване на оптичната плътност на разтвор на оцветен комплекс, образуван от взаимодействието на протеинови молекули с молекулите на пирогаловия червен багрилен комплекс и натриев молибдат (Pyrogallol Red-Molybdate complex) в кисела среда. Интензивността на цвета на разтвора е пропорционална на съдържанието на протеин в изследвания материал. Наличието на детергенти в реактива осигурява еквивалентно определение на протеини с различно естество и структура.

Реагенти. 1) 1,5 mmol / l разтвор на пирогалол червено (PGA): 60 mg PGA се разтварят в 100 ml метанол. Да се ​​съхранява при температура 0–5 ° С; 2) 50 mmol / 1 сукцинатен буферен разтвор рН 2.5: 5.9 g янтарна киселина (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0.14 g натриев оксалат (Na2C204) и 0.5 g натриев бензоат (C6H5COONa) се разтварят в 900 ml дестилирана вода; 3) 10 mmol / l разтвор на натриев молибдат кристален хидрат (Na2Mo04 × 2H2O): 240 mg натриев молибдат се разтварят в 100 ml дестилирана вода; 4) Работен реактив: към 900 ml сукцинатен буферен разтвор се добавят 40 ml от разтвора на ПХК и 4 ml разтвор на натриев молибдат. РН на разтвора се нагласява на 2,5 с 0,1 mol / l разтвор на солна киселина (HCl) и неговият обем се регулира до 1 1. Реагентът в тази форма е готов за употреба и е стабилен, когато се съхранява на тъмно и при температура 2–25 ° C в продължение на 6 месеца; 5) 0,5 g / l стандартен разтвор на албумин.

Курсът на определяне. 0.05 ml от изследваната урина се въвеждат в първата епруветка, 0,05 ml стандартен разтвор на албумин се добавят към втората епруветка и 0,05 ml дестилирана вода към третата епруветка (контролна проба), след което към тези епруветки се добавят 3 ml работен реагент. Съдържанието на епруветките се смесва и след 10 минути пробата и стандартът се фотометрират срещу контролна проба при дължина на вълната 596 nm в кювета с дължина на оптичния път 10 mm.

Изчисляването на концентрацията на протеин в анализираната проба от урина се извършва по формулата:

C = 0.5 × Apr / Ast,

където С е концентрацията на протеин в анализираната проба от урина, g / l; Apr и Ast - екстинкция на изследваната проба урина и стандартен разтвор на албумин, g / l; 0.5 - концентрация на стандартен разтвор на албумин, g / l.

• цветът на разтвора (цветен комплекс) е стабилен за един час;
• пряко пропорционална връзка между концентрацията на протеин в пробата и абсорбцията на разтвора зависи от типа на фотометъра;
• когато съдържанието на протеин в урината е над 3 g / l, пробата се разрежда с изотоничен разтвор на натриев хлорид (9 g / l) и определянето се повтаря. Степента на разреждане се взема предвид при определяне на концентрацията на протеина.

• Определяне на протеини в урината
• Опит за обединена сулфосалицилова киселина
• Единният брандберг - метод на Робъртс - Столников
• Определяне на количеството протеин в урината чрез реакция със сулфосалицилова киселина
• Биуретов метод
• Откриване в урината на Bens - Jones протеин

Протеинурията е явление, при което се открива протеин в урината, което показва възможността за увреждане на бъбреците и е фактор за развитието на сърдечни, кръвни и лимфни заболявания.

Откриването на протеин в урината не винаги показва заболяване. Подобно явление е характерно дори за абсолютно здрави хора, при които може да се открие белтък в урината. Хипотермия, физическо натоварване, консумация на протеинови храни води до появата на протеин в урината, който изчезва без никакво лечение.

По време на скрининга, 17% от практически здравите хора определят протеини, но само 2% от този брой показват положителен тестов резултат като признак на бъбречно заболяване.

Протеиновите молекули не трябва да влизат в кръвта. Те са жизненоважни за организма - те са строителен материал за клетките, участват в реакции като коензими, хормони, антитела. И при мъжете, и при жените процентът е пълната липса на протеин в урината.

Функцията за предотвратяване загубата на протеинови молекули от организма се извършва от бъбреците.

В филтрирането на урината участват две системи на бъбреците:

1. гломерули - не позволявайте в големи молекули, но не запазват албумин, глобулини - малка част от протеинови молекули;
2. бъбречни тубули - адсорбиращи се протеини, филтрирани гломерули, връщане обратно в кръвоносната система.

Албумин (около 49%), мукопротеини, глобулини се откриват в урината, от които делът на имуноглобулините е около 20%.

Глобулини - суроватъчни протеини с високо молекулно тегло, които се произвеждат в имунната система и в черния дроб. Повечето от тях се синтезират от имунната система, се отнася до имуноглобулини или антитела.

Албумините са част от протеините, които се появяват първо в урината, дори и при леко увреждане на бъбреците. Съществува определено количество албумин в здравословната урина, но е толкова незначително, че не може да бъде открито чрез лабораторна диагностика.

По-ниският праг, който може да бъде открит чрез лабораторна диагностика, е 0,033 g / l. Ако на ден се загуби повече от 150 mg протеин, те говорят за протеинурия.

Основни данни за протеини в урината

Заболяването с лека протеинурия е асимптоматично. Визуално, урината без протеини не може да бъде разграничена от урината, в която има малко количество протеин. Донякъде пенестата урина вече е с висока степен на протеинурия.

Възможно е да се приеме активно екскреция на белтък в урината от външния вид на пациента само с умерена или тежка степен на заболяването, поради появата на оток на крайниците, лицето, корема.

В ранните стадии на заболяването следните индиректни признаци на протеинурия могат да бъдат следните:

• обезцветяване на урината;
• нарастваща слабост;
• липса на апетит;
• гадене, повръщане;
• болка в костите;
• сънливост, замаяност;
• повишена температура.

Появата на такива признаци не може да се пренебрегне, особено по време на бременност. Това може да означава леко отклонение от нормата и може да бъде симптом на развиваща се прееклампсия, прееклампсия.

Количествената оценка на загубата на протеин не е лесна задача и няколко лабораторни теста се използват за постигане на по-пълна картина на състоянието на пациента.

Трудностите при избора на метод за откриване на излишния протеин в урината се обясняват с:

• ниска концентрация на протеин, за която признаването изисква високо прецизни инструменти;
• състав на урината, усложнява задачата, тъй като съдържа вещества, които нарушават резултата.

Най-голямата информация се осигурява от анализа на първата сутрешна порция урина, която се събира след събуждане.

В навечерието на анализа трябва да бъдат изпълнени следните условия:

• Не яжте пикантни, пържени, протеинови храни, алкохол;
• изключва диуретик за 48 часа;
• ограничаване на физическата активност;
• внимателно спазвайте правилата за лична хигиена.

Утринната урина е най-информативна, тъй като е дългосрочна в пикочния мехур, по-малко зависима от приема на храна.

Количеството протеин в урината може да се анализира чрез случайна част, която се взема по всяко време, но този анализ е по-малко информативен, колкото по-голяма е вероятността от грешка.

За количествено определяне на дневната загуба на протеин се прави анализ на общата дневна урина. За да направите това, в рамките на 24 часа, събрани в специален пластмасов контейнер цялата урина, разпределени за деня. Можете да започнете да събирате по всяко време. Основното условие - точно денят на събиране.

Качественото определение на протеинурия се основава на денатурирането на протеина чрез физични или химични фактори. Качествените методи са свързани със скрининг, който позволява да се установи наличието на протеин в урината, но не дава възможност за точна оценка на степента на протеинурия.

Използвани образци:

• с кипене;
• сулфосалицилова киселина;
• азотна киселина, реагент Larionic в проба на Хелър.

Проба със сулфосалицилова киселина се извършва чрез сравняване на проба с контролна урина с опитен, при което към урината се прибавят 7-8 капки от 20% сулфосалицилова киселина. Изводът за наличието на протеина се прави съгласно интензивността на опалесциращата мътност, която се появява в епруветката по време на реакцията.

По-често се използва тест на Гелер, използващ 50% азотна киселина. Чувствителността на метода е 0.033 g / l. При такава концентрация на протеин в епруветка с проба от урина и реагент за 2-3 минути след началото на експеримента се появява пръстен от бяла нишка, образуването на което показва наличието на протеин.

Полуколичествените методи включват:

• метод за определяне на протеин в тест ленти за урина;
• Метод Брандберг-Робъртс-Столников.

Методът на определяне по метода на Брандберг-Робъртс-Столников се основава на метода на пръстена на Гелер, но позволява да се оцени по-точно количеството на протеина. При извършване на тест с помощта на тази техника, няколко разреждания на урината постигат появата на нишкоподобен протеинов пръстен в интервала от 2 до 3 минути от началото на теста.

На практика методът на тест-лентите се използва с приложен багрило бромофенол синьо като индикатор. Недостатъкът на тест лентите е селективна чувствителност към албумин, което води до изкривяване на резултата в случай на повишаване на концентрацията на урината в глобулини или други протеини.

Недостатъците на метода са също относително ниската чувствителност на теста към протеина. Тест лентите започват да реагират на присъствието на протеин в урината при концентрация на протеин, по-голяма от 0,15 g / l.

Методите за количествена оценка могат да бъдат разделени условно на:

Методите се основават на свойствата на протеините за намаляване на разтворимостта под действието на свързващо средство с образуването на слабо разтворимо съединение.

Агенти, които причиняват свързване с протеини, могат да бъдат:

• сулфосалицилова киселина;
• трихлороцетна киселина;
• бензетониев хлорид.

По резултатите от тестовете се правят заключения въз основа на степента на затихване на светлинния поток в пробата със суспензия в сравнение с контролната. Резултатите от този метод не винаги могат да се отдадат на надеждни поради разликите в условията на: скоростта на смесване на реагентите, температурата, киселинността на средата.

Ефектът върху оценката на приема на лекарството предишния ден, преди провеждането на тестове с помощта на тези методи, не може да се вземе:

• антибиотици;
• сулфонамиди;
• лекарства, съдържащи йод.

Методът се отнася до налична по себестойност, която позволява тя да бъде широко използвана за скрининг. Но по-точни резултати могат да бъдат получени чрез по-скъпи колориметрични техники.

Чувствителните методи, които точно определят концентрацията на протеин в урината, включват колориметрични методи.

Можете да го направите с висока точност:

• биуретова реакция;
• техника Лоури;
• Техники за оцветяване, които използват багрила, които образуват комплекси с протеини в урината, които се различават визуално от пробата.

Колориметрични методи за откриване на протеин в урината

Методът се отнася до надеждна, високочувствителна, позволяваща да се определи в урината албумин, глобулини, парапротеини. Използва се като основен метод за изясняване на противоречивите резултати от тестовете, както и дневния протеин на урината при пациенти с нефрологични отделения на болниците.

Още по-точни резултати могат да се постигнат чрез метода на Лоури, който се основава на биуретната реакция, както и на реакцията на Фолин, която разпознава триптофан и тирозин в протеиновите молекули.

За да се елиминират възможните грешки, пробата от урината се пречиства чрез диализа от аминокиселини, пикочна киселина. Грешки са възможни, когато се използват салицилати, тетрациклини, хлорпромазин.

Най-точен метод за определяне на протеин се основава на неговото свойство да се свързва с боите, от които се използва:

• Понсо;
• Комаси блестящо синьо;
• пирогално червено.

През деня количеството на екскретирания протеин в урината варира. За по-обективна оценка на загубата на протеин в урината, въведете понятието дневен протеин в урината. Тази стойност се измерва в g / ден.

За бърза оценка на дневния протеин в урината, количеството на протеина и креатинина се определя в една порция урина, след което съотношението протеин / креатинин се извлича от загубата на протеин на ден със съотношението.

Методът се основава на факта, че степента на екскреция на уринарен креатинин е постоянна, не се променя през деня. При здрав човек нормалното съотношение на протеин: креатинин в урината е 0,2.

Този метод елиминира възможни грешки, които могат да възникнат при събиране на дневната урина.

Качествените тестове по-често от количествените тестове дават фалшиви положителни или лъжливи отрицателни резултати. Грешки възникват във връзка с лекарства, хранителни навици, физическа активност в навечерието на анализа.

Декодирането на това качествено изпитване се дава чрез визуална оценка на мътността в епруветката в сравнение с резултатите от изпитването с контролата:

1. слабата положителна реакция се оценява като +;
2. положителен ++;
3. рязко положителен +++.

Тестът на пръстена на Гелер по-точно оценява наличието на протеин в урината, но не позволява количествено определяне на протеина в урината. Както и при теста на сулфосалициловата киселина, тестът на Geller дава само приблизителна представа за съдържанието на протеин в урината.

Методът позволява да се оцени степента на протеинурия количествено, но отнема твърде много време, неточна, тъй като при силно разреждане точността на оценката намалява.

За да изчислите протеина, трябва да умножите степента на разреждане на урината с 0, 033 g / l:

Тестът не изисква специални условия, тази процедура е лесно да се направи у дома. За да направите това, трябва да спуснете тест лентата в урината за 2 минути.

Резултатите ще бъдат изразени чрез броя на плюсовете на лентата, декодирането на които се съдържа в таблицата:

1. Резултатите от теста, съответстващи на стойности до 30 mg / 100 ml, съответстват на физиологичната протеинурия.
2. Стойностите на тест лентите 1+ и 2 ++ означават значителна протеинурия.
3. Стойностите на 3 +++, 4 ++++ се характеризират с патологична протеинурия, причинена от бъбречни заболявания.

Тест лентите могат само приблизително да определят увеличения протеин в урината. Те не се използват за точна диагностика, а още повече, че не могат да кажат какво означава това.

Не позволявайте тест лентите да оценяват адекватно количеството протеин в урината при бременни жени. По-надежден метод за оценка е определянето на протеини в дневната урина.

Определяне на протеини в урината с тест ленти:

Ежедневният протеин в урината е по-точна диагноза за оценка на функционалното състояние на бъбреците. За това трябва да съберете цялата урина, отделяна от бъбреците на ден.

Съдържанието на протеин в урината може да се намери чрез съотношението протеин: креатинин, данните са показани в таблицата:

Валидните стойности за съотношението протеин / креатинин са данните в таблицата:

При загуба на повече от 3,5 g протеин на ден, състоянието се нарича масивна протеинурия.

Ако има много протеини в урината, преразглеждане е необходимо след 1 месец, след 3 месеца, според резултатите, които установяват защо нормата е надвишена.

Причините за повишаване на протеина в урината е повишеното му производство в организма и нарушаването на бъбреците, разграничаване на протеинурия:

• физиологични - незначителни отклонения от нормата се причиняват от физиологични процеси, разрешени спонтанно;
• патологични - промените се причиняват от патологичния процес в бъбреците или други органи на тялото, без прогресиране на лечението.

Леко увеличение на протеина може да се наблюдава при обилно протеиново хранене, механични изгаряния, наранявания, придружени от повишено производство на имуноглобулини.

Леката протеинурия може да бъде причинена от физическо натоварване, психо-емоционален стрес или приемане на определени лекарства.

Физиологичната протеинурия е увеличение на белтъка в урината при децата в първите дни след раждането. Но след седмица от живота, съдържанието на протеин в урината на детето се счита за отклонение от нормата и показва развиваща се патология.

Бъбречни заболявания, инфекциозни заболявания също понякога се придружават от появата на протеин в урината.

Такива състояния обикновено съответстват на лека степен на протеинурия, са преходни явления, бързо преминават самостоятелно, без да се изисква специално лечение.

По-тежки състояния, тежка протеинурия се отбелязва при: t

• гломерулонефрит;
• диабет;
• сърдечно заболяване;
• рак на пикочния мехур;
• множествен миелом;
• инфекция, увреждане на лекарството, поликистозно бъбречно заболяване;
• високо кръвно налягане;
• системен лупус еритематозус;
• Синдром на Goodpasture.

Чревна обструкция, сърдечна недостатъчност и хипертиреоидизъм могат да причинят следи от протеин в урината.

Сортовете на протеинурия се класифицират по няколко начина. За качествена оценка на протеините може да се използва класификацията на Ярошевски.

Според систематиката на Ярошевски, създадена през 1971 г., се различава протеинурията:

1. бъбречна - която включва нарушение на гломерулната филтрация, освобождаване на протеин от тубулите, липсата на повторна адсорбция на протеините в тубулите;
2. prerenal - се случва извън бъбреците, екскреция на хемоглобин, протеини, които се срещат в излишък в кръвта в резултат на множествена миелома;
3. Postrenal - възниква на мястото на пикочните пътища след бъбреците, екскрецията на протеин в разрушаването на пикочните органи.

За количествена оценка на това, което се случва, условно се изолират степените на протеинурия. Трябва да се помни, че те могат лесно да преминат в по-тежко, без лечение.

Най-тежката фаза на протеинурия се развива със загуба на повече от 3 g протеин на ден. Загубата на протеин от 30 mg до 300 mg на ден съответства на умерена фаза или микроалбумурия. До 30 mg протеин в дневната урина означава лека протеинурия.

Протеин нормата в урината колко?

Нормален протеин в урината практически липсва (по-малко от 0,002 g / l). Въпреки това, при някои условия, малко количество протеин може да се появи в урината при здрави индивиди след поглъщане на голямо количество протеинови храни, в резултат на охлаждане, с емоционален стрес, продължително физическо натоварване (т.нар. Маршируваща протеинурия).

Появата на значително количество протеин в урината (протеинурия) е патология. Причината за протеинурията може да бъде бъбречно заболяване (остър и хроничен гломерулонефрит, пиелонефрит, бременна нефропатия и др.) Или пикочните пътища (възпаление на пикочния мехур, простатата, уретерите). Бъбречната протеинурия може да бъде органична (гломерулна, тубуларна и свръх) и функционална (фебрилна протеинурия, ортостатична при юноши, при хранене на бебета, при новородени). Функционалната протеинурия не е свързана с бъбречна патология. Дневната доза протеин варира при пациенти от 0,1 до 3,0 g или повече. Съставът на протеините в урината се определя чрез електрофореза. Появата на белтъка на Bens-Jones в урината е характерна за миелома и Waldenstrom macroglobulinemia, 2 микроглобулина в случай на увреждане на бъбречните тубули.

Нормален протеин в урината практически липсва (по-малко от 0,002 g / l).

Основните признаци на заболяване, открити в изследването на урината.

SG Специфично тегло. Намаляването на специфичното тегло показва намаляване на способността на бъбреците да концентрират урината и да отделят токсините от организма, какъвто е случаят с бъбречната недостатъчност. Увеличаването на специфичното тегло е свързано с голямо количество захар в урината, соли. Трябва да се отбележи, че е невъзможно да се оцени специфичното тегло за само един тест на урината, може да има случайни промени, необходимо е да се извърши повторно 1-2 пъти изследването на урината.

Протеинов протеин в урината - протеинурия. Причината за протеинурията може да бъде увреждане на бъбреците при нефрит, амилоидоза и увреждане от отрови. Протеин в урината може да се появи и поради заболявания на пикочните пътища (пиелонефрит, цистит, простатит).

Глюкоза (захар) в урината - гликозурия - най-често поради диабет. По-рядка причина е поражението на бъбречните тубули. Много е обезпокоително, ако кетоновите тела се откриват заедно със захарта в урината. Това се случва при тежък, неправилен диабет и е предвестник на най-тежките усложнения на диабета - диабетна кома.

Билирубин, уробилиноген Билирубин и уробилин се определят в урината при различни форми на жълтеница.

Еритроцити Еритроцити в урината - хематурия. Това се случва или с поражението на самите бъбреци, най-често с тяхното възпаление, или при пациенти със заболявания на пикочните пътища. Ако, например, един камък се движи по тях, той може да нарани лигавицата, ще има червени кръвни клетки в урината. Разлагащият се тумор на бъбреците също може да доведе до хематурия.

Левкоцити Левкоцити в урината - левкоцитурия, най-често резултат от възпалителни промени в пикочните пътища при пациенти с пиелонефрит, цистит. Левкоцитите често се определят от възпаление на женските външни полови органи, при мъжете, от възпаление на простатната жлеза.

Цилиндри Цилиндрите са особени микроскопични структури. Хиалинови цилиндри в количество от 1-2 могат да бъдат в здрав човек. Те се образуват в бъбречните тубули, тя се слепва заедно с протеиновите частици. Но увеличаването на техния брой, цилиндрите от други видове (гранули, еритроцити, мазнини) винаги показват увреждането на самата бъбречна тъкан. Има цилиндри при възпалителни заболявания на бъбреците, метаболитни лезии, като диабет.

Информационен метод и неговите граници. Информационното съдържание на общия тест на урината за разпознаване на специфични заболявания на бъбреците е ниско, обикновено изисква допълнителни, по-точни изследвания. Но изследванията са много важни, особено при провеждането на превантивни проучвания, тъй като позволява да се идентифицират ранните признаци на бъбречно заболяване. Известно е също, че често се наблюдават скрити заболявания на бъбреците и само изследването на урината им позволява да подозират и да проведат по-нататъшно необходимо изследване.

В повечето лаборатории, когато изследват урината за протеини, първо използвайте качествени реакции, които не откриват белтък в урината на здрав човек. Ако протеинът в урината се открие чрез качествени реакции, се извършва количествено (или полуколичествено) определяне. В същото време са важни характеристиките на използваните методи, покриващи различен спектър от уропротеини. Така, когато се определя протеин, използвайки 3% сулфосалицилова киселина, количеството протеин се счита за нормално до 0,03 г / л, докато при използване на пирогалолния метод, границата на нормалните протеинови стойности нараства до 0,1 г / л. Във връзка с това, в анализа е необходимо да се посочи нормалната стойност на протеина за метода, използван от лабораторията.

При определяне на минималните количества протеин се препоръчва да се повтори анализът, в случай на съмнение трябва да се определи дневната загуба на протеин в урината. Нормалната дневна урина съдържа протеини в малки количества. При физиологични условия, филтрираният протеин е почти напълно реабсорбиран от епитела на проксималните тубули и съдържанието му в дневното количество на урината варира според различните автори от следи до 20 50, 80 100 mg и дори до 150 200 mg. Някои автори смятат, че дневната екскреция на протеин в размер на 30 50 mg / ден е физиологична норма за възрастен. Други смятат, че екскрецията на протеини в урината не трябва да надвишава 60 mg / m2 телесна повърхност на ден, с изключение на първия месец от живота, когато стойността на физиологичната протеинурия може да бъде четири пъти по-висока от посочените стойности.

Общото условие за появата на протеини в урината на здравия човек е тяхната сравнително висока концентрация в кръвта и молекулното тегло не повече от 100,200 kDa.

това не е норма, с вашата диагноза е възможно, друго е, че за нефротичния синдром това е всъщност малък индикатор.. погледнете в клиниката - подуване, натиск и т.н., продължете да приемате предписаното лечение.

и все пак ще кажа: нормално е да не бъде!