Патологичната протеинурия е един от най-важните и постоянни признаци на заболявания на бъбреците и пикочните пътища. Определянето на концентрацията на протеин в урината е съществен и важен елемент от изследването на урината. Идентифицирането и количествената оценка на протеинурията е важно не само при диагностицирането на много първични и вторични бъбречни заболявания, но и оценката на промените в тежестта на протеинурията в динамиката носи информация за хода на патологичния процес, за ефективността на лечението. Откриването на протеин в урината, дори и в следи, трябва да бъде тревожно за евентуално бъбречно заболяване или пикочни пътища и изисква повторно изследване. От особено значение е безсмислието на изследванията на урината и по-специално определянето на протеина в урината, без да се спазват всички правила за събирането му.

Всички методи за определяне на протеин в урината могат да се разделят на:

• качество,
• полуколичествено,
• Количествен.

Качествени методи

Всички висококачествени проби от урина се основават на способността на протеините да денатурират под въздействието на различни физични и химични фактори. В присъствието на протеин в пробата от урина има или мътност или загуба на флокулентен седимент.

Условия за определяне на протеин в урината въз основа на реакцията на коагулация:

1. Урината трябва да бъде кисела. Алкалната урина се подкислява с няколко (2-3) капки оцетна киселина (5-10%).
2. Урината трябва да е ясна. Мътността се елиминира през хартиен филтър. Ако мътността не изчезне, добавете талк или изгорял магнезий (около 1 чаена лъжичка на 100 ml урина), разклатете и филтрирайте.
3. Качествен тест трябва да се извърши в две тръби, едната от които - контрола.
4. Търсенето на мътност трябва да бъде на черен фон при преминаваща светлина.

Качествените методи за определяне на протеина в урината включват:

Както показват многобройни изследвания, нито един от големия брой добре познати методи за качествено определяне на протеина в урината не позволява получаване на надеждни и възпроизводими резултати. Въпреки това, в повечето CDL в Русия, тези методи се използват широко като скрининг - в урината с положителна качествена реакция, по-нататък се извършва количествено определяне на протеини. От качествените реакции по-често се използват тест на Гелер и проба със сулфосалицилова киселина, но се счита, че проба със сулфосалицилова киселина е най-подходяща за откриване на патологична протеинурия. Тестът за кипене в момента практически не се използва поради неговата трудоемкост и продължителност.

Полуколичествени методи

Методът Брандберг-Робъртс-Столников се основава на теста на пръстена на Гелер, така че при този метод се наблюдават същите грешки, както при теста на Гелер.

Понастоящем диагностичните ленти все по-често се използват за определяне на протеина в урината. За полуколичественото определяне на протеин в урината върху лента, най-често използваното багрило е бромофенолово синьо в цитратен буфер. Съдържанието на протеин в урината се оценява по интензивността на синьо-зеления цвят, който се развива след контакт на реакционната зона с урината. Резултатът се оценява визуално или с помощта на анализатори на урина. Въпреки голямата популярност и очевидните предимства на методите за суха химия (простота, бързина на анализа), тези методи за изследване на урината като цяло и по-специално определяне на протеини не са без сериозни недостатъци. Едно от тях, което води до изкривяване на диагностичната информация, е по-голямата чувствителност на индикатора на бромфеноловия син към албумина в сравнение с други протеини. В тази връзка тест лентите са адаптирани главно за откриване на селективна гломерулна протеинурия, когато почти всички белтъци в урината са представени от албумин. С прогресирането на промените и преминаването на селективна гломерулна протеинурия към неселективна (появата на глобулини в урината), резултатите от определянето на протеина са подценени в сравнение с истинските стойности. Този факт прави невъзможно използването на този метод за определяне на протеина в урината, за да се оцени състоянието на бъбреците (гломерулен филтър) с течение на времето. При тубуларната протеинурия резултатите от определяне на протеини също са подценени. Определянето на протеини с помощта на диагностични ленти не е надежден индикатор за ниски нива на протеинурия (повечето от наличните в момента диагностични ленти нямат способността да улавят белтък в урината при концентрация по-ниска от 0,15 g / l). Отрицателните резултати от определяне на протеини върху ивици не изключват наличието в урината на глобулини, хемоглобин, уромукоид, протеин Bens-Jones и други парапротеини.

Люспи от слуз с високо съдържание на гликопротеини (например при възпалителни процеси в пикочните пътища, пиурия, бактериурия) могат да се установят на индикаторната зона на лентата и да доведат до фалшиво положителни резултати. Фалшиво положителните резултати могат да бъдат свързани и с висока концентрация на урея. Лошото осветление и лошото цветово възприятие могат да доведат до неточни резултати.

В тази връзка използването на диагностични ленти следва да бъде ограничено до процедурите за проверка, а резултатите, получени с тяхна помощ, следва да се разглеждат само като индикативни.

Количествени методи

Правилното количествено определяне на протеина в урината в някои случаи не е лесна задача. Трудностите при неговото решение се определят от следния брой фактори:

• ниско съдържание на протеин в урината на здрав човек, често на прага на чувствителност на повечето известни методи;
• наличието в урината на много съединения, които могат да попречат на хода на химичните реакции;
• значителни колебания в съдържанието и състава на протеините в урината при различни заболявания, които затрудняват избора на подходящ калибровъчен материал.

В клиничните лаборатории се използват така наречените "рутинни" методи за определяне на протеин в урината, но те не винаги дават задоволителни резултати.

От гледна точка на специалист-анализатор, работещ в лабораторията, методът, предназначен за количественото определяне на протеина в урината, трябва да отговаря на следните изисквания:

• имат линейна зависимост между абсорбцията на комплекса, образувана по време на химическата реакция, и съдържанието на протеин в пробата в широк диапазон от концентрации, като по този начин се избягват допълнителни операции при подготовката на пробата за изследването;
• трябва да бъде прост, да не изисква висококвалифициран изпълнител, да се извършва с малък брой операции;
• имат висока чувствителност, аналитична надеждност при използване на малки количества от изследваните материали;
• да бъдат устойчиви на различни фактори (вариации в състава на пробата, наличието на лекарства и др.);
• имат приемлива цена;
• да бъдат лесно приспособими към автоматични анализатори;
• резултатът от определянето не трябва да зависи от протеиновия състав на пробата за урина.

Нито един от известните понастоящем методи за количествено определяне на протеин в урината не може напълно да претендира за "златен стандарт".

Количествените методи за определяне на протеин в урината могат да бъдат разделени на турбидиметрични и колориметрични.

Турбидиметрични методи

Турбидиметричните методи включват:

• определяне на протеин със сулфосалицилова киселина (SSC),
• определяне на протеин с трихлороцетна киселина (THC),
• определяне на протеин с бензетониев хлорид.

Турбидиметричните методи се основават на намаляване на разтворимостта на протеини в урината, дължащо се на образуването на суспензия от суспендирани частици под влиянието на утаителни агенти. Съдържанието на протеин в тестовата проба се преценява или чрез интензивността на разсейването на светлината, определена от броя на разсейващите светлина частици (нефелометричен метод за анализ), или чрез затихване на светлинния поток от получената суспензия (турбидиметричен метод за анализ).

Степента на разсейване на светлината в утаяващите методи за откриване на протеин в урината зависи от много фактори: скоростта на смесване на реагентите, температурата на реакционната смес, рН на средата, наличието на чужди съединения, методи на фотометрия. Внимателното придържане към реакционните условия допринася за образуването на стабилна суспензия с постоянен размер на частиците и получаване на относително възпроизводими резултати.

Някои лекарства влияят върху резултатите от турбидиметричните методи за определяне на протеина в урината, което води до т.нар. „Фалшиво-положителни“ или „фалшиво-отрицателни“ резултати. Те включват някои антибиотици (бензилпеницилин, клоксацилин и др.), Радиоактивни йодосъдържащи вещества, сулфатни лекарства.

Турбидиметричните методи са слабо стандартизирани, което често води до погрешни резултати, но въпреки това те се използват широко в лабораториите поради ниската цена и наличието на реагенти. Най-широко използваният метод в Русия е определянето на протеин със сулфосалицилова киселина.

Колориметрични методи

Най-чувствителните и точни са колориметричните методи за определяне на общия протеин на урината, въз основа на специфични протеинови реакции в цвета.

Те включват:

1. биуретова реакция,
2. Метод на Лоури
3. методи, основани на способността на различни багрила да образуват комплекси с протеини:
   • Понсо S (Понсо S),
   • Блестящ син цвят на Coomassie
   • Пирогалово червено.

От гледна точка на изпълнителя, в ежедневната работа на лабораторията с голям поток на изследванията, биуретният метод е неудобен поради големия брой операции. В същото време методът се характеризира с висока аналитична надеждност, позволява определяне на протеини в широк диапазон от концентрации и откриване на албумин, глобулини и парапротеини със сравнима чувствителност, в резултат на което биуретният метод се счита за референтен и се препоръчва за сравнение на други аналитични методи за откриване на протеин в урината. Биуретният метод за определяне на протеин в урината се провежда за предпочитане в лаборатории, обслужващи нефрологичните отделения, и се използват в случаите, когато резултатите от определянето с помощта на други методи са съмнителни, както и за определяне на размера на дневната загуба на протеин при нефрологични пациенти.

Методът Лоури, който има по-висока чувствителност от биуретния метод, съчетава биуретната реакция и реакцията на Фолин към аминокиселините тирозин и триптофан в протеиновата молекула. Въпреки високата чувствителност, този метод не винаги дава надеждни резултати при определяне на съдържанието на протеин в урината. Причината за това е неспецифичното взаимодействие на реактива на Фолин с непротеинови компоненти на урината (най-често аминокиселини, пикочна киселина, въглехидрати). Разделянето на тези и други компоненти на урината чрез диализа или протеиново утаяване позволява успешно да се използва този метод за количествено определяне на протеини в урината. Някои лекарства - салицилати, хлорпромазин, тетрациклини са в състояние да повлияят на този метод и да деформират резултатите от изследването.

Достатъчната чувствителност, добрата възпроизводимост и лекотата на определяне на протеините чрез свързване на багрила правят тези методи обещаващи, но високата цена на реактивите предотвратява по-широкото им използване в лабораториите. Понастоящем пирогалолният червен метод става все по-често срещан в Русия.

При провеждане на изследване на нивото на протеинурия, трябва да се има предвид, че различните методи за определяне на протеинурията имат различна чувствителност и специфичност към множество протеини в урината.

Въз основа на емпиричните данни се препоръчва да се определи протеинът по два различни метода и да се изчисли истинската стойност, като се използва една от следните формули:

протеинурия = 0.4799 В + 0.5230 L;
протеинурия = 1.5484 В - 0.4825 S;
протеинурия = 0.2167 S + 0.7579 L;
протеинурия = 1.0748 Р - 0.0986 В;
протеинурия = 1.0104 Р - 0.0289 S;
протеинурия = 0.8959 Р + 0.0845 L;

когато:
Б - резултат от измерването с Coomassie G-250;
L е резултатът от измерването с реактив на Lowry;
Р - резултат от измерването с пирогалол молибдат;
S е резултатът от измерването със сулфосалицилова киселина.

Като се имат предвид изразените колебания в нивото на протеинурия в различно време на деня, както и зависимостта на концентрацията на протеин в урината от диуреза, различното му съдържание в отделните порции на урината, сега е често за бъбречната патология да се оцени тежестта на протеинурията чрез дневната загуба на протеин в урината, т.е. дневна протеинурия. Тя се изразява в g / ден.

Ако е невъзможно да се събира дневна урина, се препоръчва да се определи концентрацията на протеин и креатинин в една порция урина. Тъй като скоростта на освобождаване на креатинин през деня е доста постоянна и не зависи от промените в скоростта на уриниране, съотношението на протеиновата концентрация към креатининовата концентрация е постоянно. Това съотношение корелира добре с дневната екскреция на протеин и следователно може да се използва за оценка на тежестта на протеинурията. Нормалното съотношение протеин / креатинин трябва да бъде по-малко от 0,2. Протеинът и креатининът се измерват в g ​​/ l. Важно предимство на метода за оценка на тежестта на протеинурията от съотношението протеин-креатинин е пълното елиминиране на грешки, свързани с неспособността или непълното събиране на дневната урина.

Литература:

• О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, "Клинични аспекти на откриването и оценката на протеинурията", Наръчник на ръководителя на CPL, № 1, януари 2007 г.
• А. В. Козлов, "Протеинурия: методи за нейното откриване", лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000
• В. Л. Емануел, “Лабораторна диагностика на бъбречно заболяване. Уринарен синдром ”, - Наръчник на ръководителя на KDL, № 12, декември 2006
• VI Pupkova, L.M. Прасолов - Определяне на протеини в урината и цереброспиналната течност. Колцово, 2007
• Наръчник за клинични лабораторни методи за изследване. Ед. Е. А. Кост. Москва, "Медицина", 1975

Свързани статии

Количествени методи за определяне на общия протеин на урината

Всяка проба от урина е подходяща за количествено определяне на протеини. Повечето изследователи предпочитат да определят количеството протеин в урината, събрано на ден, за да се установи дневната загуба на протеин.

Раздел: Анализ на урината

Полуколичествени методи за определяне на общия протеин в урината

Понастоящем диагностичните ленти все по-често се използват за определяне на протеина в урината. За полуколичественото определяне на протеин в урината върху лента, най-често използваното багрило е бромофенолово синьо в цитратен буфер. Съдържанието на протеин в урината се оценява по интензивността на синьо-зеления цвят, който се развива след контакт на реакционната зона с урината.

Раздел: Анализ на урината

Качествени методи за определяне на общия протеин в урината

Всички висококачествени проби от урина се основават на способността на протеините да денатурират под въздействието на различни физични и химични фактори. В присъствието на протеин в пробата от урина има или мътност или загуба на флокулентен седимент.

Раздел: Анализ на урината

Определяне на протеина в урината в проба с 20% сулфосалицилова киселина

Пробата с 20% сулфосалицилова киселина се отнася до качествени реакции за определяне на протеин в урината. Тъй като се основава на коагулационната реакция, изследваната урина трябва да отговаря на определени изисквания: да бъде прозрачна и да има кисела реакция.

Раздел: Анализ на урината

Тест на Geller пръстен

Тестът на Geller е качествена реакция за определяне на протеина в урината. Тъй като се основава на коагулационната реакция, изследваната урина трябва да отговаря на определени изисквания: да бъде прозрачна и да има кисела реакция.

Раздел: Анализ на урината

Методи за определяне на протеин в урината

Малко количество протеин в дневната урина също се открива при напълно здрави индивиди, но такива малки концентрации не се откриват в единични порции, използвайки понастоящем използвани методи. Приблизително 70% от протеините на урината на здрав човек отчитат уромукоид, протеин, който е продукт на бъбречната тъкан; по този начин делът на гломерулния протеин в урината на здравите хора е пренебрежимо малък, а протеинурията обикновено е 50-150 mg / ден, като повечето протеини в урината са идентични със суроватката.

Приема се да се разграничават следните форми на протеинурия в зависимост от мястото на произход: преренал, свързан с повишено разграждане на тъканните протеини, тежка хемолиза; бъбречна, поради патологията на бъбреците, която може да се раздели на гломерулна и тубуларна; постренални, свързани с патологията на пикочните пътища и най-често причинени от възпалителна ексудация.

В зависимост от продължителността на съществуването, те отделят персистираща протеинурия, която съществува в продължение на много седмици и дори години, и преходни, появяващи се периодично, понякога дори и при отсъствие на бъбречно заболяване, например, с треска и тежка интоксикация. Препоръчително е да се прави разлика между променливостта на протеинурията: с дневна загуба на протеин до 1 g - умерена, от 1 до 3 g - средна и повече от 3 g - изразена.

Откриването в урината на протеини с относително голямо молекулно тегло показва липсата на селективност на бъбречния филтър и неговото изразено увреждане. В тези случаи се говори за ниска селективност на протеинурията. Следователно, понастоящем дефиницията на протеинови фракции на урината е широко разпространена. Най-точните методи са електрофореза в нишесте и полиакриламидни гелове.
Според резултатите, получени от тези методи, може да се прецени селективността на протеинурията.

Най-качествените и количествени методи за определяне на протеина в урината се основават на коагулацията му в обема на урината или на интерфейса между средата (урина и киселина); ако има начин за измерване на интензивността на коагулацията, тогава пробата става количествена.

Анализ на общата сулфосалицилова киселина:

Изискван реагент:

20% разтвор на сулфосалицилова киселина.

Курсът на изследването:

В 2 епруветки се налива 3 мл филтрирана урина. В епруветката се добавят 6-8 капки реагент. На тъмен фон сравнете контролната тръба с опитен. Мътността в епруветката показва наличието на протеин, пробата се счита за положителна.

Ако реакцията на урината е алкална, тогава преди прегледа се подкислява с 2-3 капки 10% воден разтвор на оцетна киселина.

Единният метод на Брандберг-Робъртс-Столников:

Методът се основава на проба от пръстена на Гелер, която се състои в това, че на границата на азотната киселина и урината, в присъствието на протеин, настъпва коагулация и се появява бял пръстен.

Изискван реагент:

30% разтвор на азотна киселина (относителна плътност 1,2) или реагент Larionic.
Приготвяне на реагент Larion: 20-30 g натриев хлорид се разтваря чрез нагряване в 100 ml дестилирана вода, оставя се да се охлади, филтрува се. Към 99 ml от филтрата се излива 1 ml концентрирана азотна киселина.

Курсът на изследването:

1-2 ml азотна киселина (или реагент на Ларинова киселина) се изсипват в епруветката и внимателно, през стената на тръбата, се разпределя същото количество филтрирана урина. Появата на тънък бял пръстен на повърхността на две течности между 2-та и 3-та минута показва наличието на протеин в концентрация приблизително 0,033 g / l. Ако пръстенът се появи по-рано от 2 минути след наслояването, урината трябва да се разреди с вода и отново да се наслои вече разредена урина. Степента на разреждане на урината се избира в зависимост от вида на пръстена, т.е. нейната ширина, компактност и време на външен вид. С нишкоподобен пръстен, който се появява по-рано 2 минути, урината се разрежда 2 пъти, с широк - 4 пъти, с компактен - 8 пъти и т.н. Концентрацията на протеина се изчислява, като се умножи 0,033 със степента на разреждане и се изразява в грамове на 1 l (g / l).

Понякога се получава бял пръстен при наличие на големи количества урати. За разлика от протеиновия пръстен, урата е малко по-висока от границата между две течности и се разтваря, когато е леко загрята.

Количествено определяне на протеин в урината чрез мътност, образувана от добавянето на сулфосалицилова киселина:

Принципът на метода:

Интензивността на мътността по време на коагулацията на белтъка със сулфосалицилова киселина е пропорционална на неговата концентрация.

Изисквани реактиви:

1. 3% разтвор на сулфосалицилова киселина.

2. 0.9% разтвор на натриев хлорид.

3. Стандартен разтвор на албумин - 1% разтвор (1 ml разтвор, съдържащ 10 mg албумин): 1 g лиофилизиран албумин (от човешки или говежди серум) се разтваря в малко количество от 0,9% разтвор на натриев хлорид в колба с капацитет 100 и след това се довежда до марката със същия разтвор. Реагентът се стабилизира чрез добавяне на 1 ml 5% разтвор на натриев азид (NaN3). Когато се съхранява в хладилник, реагентът е валиден за 2 месеца.

Специално оборудване - фотоелектричен колориметър.

Курсът на изследването:

1.25 ml филтрирана урина се въвежда в епруветка, долива се до 5 ml с 3% разтвор на сулфосалицилова киселина и се смесва. След 5 минути те се измерват на фотоелектричен колориметър при дължина на вълната 590–650 nm (оранжев или червен светлинен филтър) срещу контрола в клетка с дължина на оптичния път 5 mm. Контролът е епруветка, в която към 1.25 ml филтрирана урина се добавят до 5 ml 0.9% разтвор на натриев хлорид. Изчислението се извършва съгласно калибрационния график, за конструирането на който се приготвят разреждания от стандартния разтвор, както е посочено в таблицата.

От всеки получен разтвор се вземат 1,25 ml и се третират като експериментални проби.

Праволинейната зависимост при изграждането на калибрационна графика се съхранява до 1 g / l. При по-високи концентрации пробата трябва да бъде разредена и да се вземе предвид разреждането в изчислението.

Фалшиво положителни резултати могат да се получат, ако има контрастни вещества в урината, съдържащи органичен йод. Следователно тестът не може да се използва при лица, приемащи йодни препарати; фалшиво положителен резултат може да се дължи и на сулфаниламидни препарати, големи дози пеницилин и високи концентрации в урината на пикочната киселина.

Биуретов метод:

Принципът на метода:

Пептидните връзки на протеина с медни соли в алкална С образуват комплекс от пурпурен цвят. Протеините се утаяват предварително с трихлороцетна киселина.

Изисквани реактиви:

1. 10% разтвор на трихлороцетна киселина.
2. 20% меден разтвор (CuSO4 H 5H2O).
3. 3% разтвор на NaOH.

Курсът на изследването:

Към 5 ml урина, взета от дневното количество, се добавят 3 ml разтвор на трихлороцетна киселина, центрофугират се до постоянен обем на утайката. Супернатантът се изсмуква с пипета, утайката се разтваря в 5 ml разтвор на NaOH. Към разтвора се прибавят 0.25 ml CuS04, сместа се разбърква и центрофугира. Супернатантът се фотометрира при дължина на вълната 540 nm в кювета с дължина на оптичния път 10 mm срещу дестилирана вода. Концентрацията на протеина се изчислява от калибровъчната крива, докато се начертава концентрацията на белтъка (g / l) на графика на у-ос и оптичната плътност на екстинкционните единици по оста на абсцисата. На базата на получената концентрация се изчислява дневната загуба на протеин в урината.

Използване на индикаторна хартия (ленти):

Протеинът може да бъде открит с помощта на индикаторна хартия (ленти), които се произвеждат от „Albuphan“, „Ames“ (Англия), „Albustix“, „Boehringer“ (Германия), „Comburtest“ и др.

Принципът се основава на феномена на т.нар. Протеинова грешка на някои киселинно-базисни показатели. Индикаторната част на хартията е наситена с тетрабромофенол синьо и цитратен буфер. Когато хартията се овлажнява, буферът се разтваря и осигурява подходящото рН за индикаторната реакция.

При 3.0-3.5 аминогрупи протеините реагират с индикатора и променят първоначалния си жълт цвят до зеленикаво синьо, след което, в сравнение с цветната скала, е възможно грубо да се оцени концентрацията на протеин в урината. Основната предпоставка за правилната работа на индикаторните ленти е да се осигури рН в диапазона от 3.0-3.5 за да се получи реакцията.

Ако хартията е в контакт с изследваната урина по-дълго от експозицията, посочена в инструкциите, цитратният буфер се разтваря в него и след това индикаторът реагира на истинското рН на урината, т.е. дава фалшиво положителна реакция. Поради факта, че буферният капацитет е ограничен, дори ако се спазват указанията в проби с твърде алкална урина (рН> 6.5), се получават фалшиви положителни резултати, а в проби с прекалено кисела урина (рН 6.5) с ниска относителна плътност. урина и при ниска концентрация на bens jones протеин.

Изисквани реактиви:

2 М ацетатен буфер рН 4.9.

Курсът на изследването:

Филтрираната урина в количество от 4 ml се смесва с 1 ml буфер и се загрява в продължение на 15 минути във водна баня при температура 56 ° С. В присъствието на Bens-Jones протеини, в рамките на 2 минути се появява изразена утайка и ако концентрацията на протеини Bens-Jones е по-малка от 3 g / l, пробата може да бъде отрицателна. На практика това е изключително рядко, тъй като в по-голямата си част концентрацията на протеин Bens-Jones в урината е значителна.

С пълна сигурност, протеинът Bens-Jones може да бъде открит чрез имуноелектрофоретично изследване, използвайки специфични серуми срещу тежките и леки вериги на имуноглобулините.

Определяне на албумоза (протеоза):

Албумозите са продукти на протеиново разцепване, чийто принцип се основава на факта, че те не се сгъват при варене, а дават положителна биуретична реакция и се осоляват с някои соли, особено амониев сулфат и цинков ацетат в кисела среда.

Нормалната урина не съдържа албумоза. Следи могат да бъдат в нормална урина в случай на примес на сперма. При патология, албумоза може да се появи в урината по време на фебрилни състояния, кръвопреливане и плазмени трансфузии, резорбция на ексудати и трансудати и дезинтеграция на тумори.

Изисквани реактиви:

1. Наситен разтвор на натриев хлорид.
2. Концентриран разтвор на сода каустик.
3. Слаб разтвор на меден сулфат (почти безцветен).

Курсът на изследването:

Прибавя се наситен разтвор на натриев хлорид (1/3 обем) към урината, подкиселена с оцетна киселина, кипва се и горещата течност се филтрира. Албутозите преминават във филтрата, при което тяхното присъствие се определя чрез биуретова реакция. Към филтрата се добавя 1/2 обем концентриран разтвор на сода каустик и няколко капки слаб разтвор на меден сулфат. При положителна проба се получава червено-виолетов цвят.

С положителен тест със сулфосалицилова киселина урината се загрява. Ако мътността изчезне и се появи отново, когато се охлади, това означава, че урината съдържа албуми или протеиновото тяло на Bens-Jones.

Протеин в урината, лабораторни изследвания

Методи за определяне на протеини в урината

За клиниката има както качествено, така и количествено определяне на белтъка в урината.

Качествени тестове за определяне на протеини в урината
Предложени са повече от 100 реакции за качествено определяне на протеина в урината. Повечето от тях се основават на белтъчни утаявания чрез физически (нагряващи) или химически средства. Наличието на протеин се доказва от появата на мътност.

Интерес представляват и колориметрични сухи проби.

По-долу ще бъде описано само най-важното за практиката на извадката.

Анализ на сулфосалициловата киселина. Към няколко милилитра урина се добавят 2-4 капки 20% разтвор на сулфосалицилова киселина. При положителна реакция се появява мътност. Резултатът се обозначава с термините: опалесценция, слабо положителна, положителна или силно положителна реакция. Тестът за сулфосалицилова киселина е един от най-чувствителните проби за установяване на протеин в урината. Тя намира дори и най-малкото анормално увеличение на протеина в урината. Благодарение на проста техника, този тест е намерил широко приложение.

Тест с асептол. Асептол е заместител на сулфосалициловата киселина. Може да се приготви от материали, налични във всяка лаборатория (фенол и сярна киселина). Като реагент се използва 20% асептолов разтвор. Тестът се провежда по следния начин: в епруветка, съдържаща 2-3 мл урина, се прибавят 0,5-1-1 мл разтвор на асептол на дъното. Ако на границата между две течности се окаже бял пръстен от коагулиран протеин, пробата е положителна.

Тест на Гелер. При няколко милилитра урина се осолява 1-2 мл 30% азотна киселина (тегло на специфичното тегло 1,20). Ако на повърхността на двете течности се получи бял пръстен, пробата е положителна. Реакцията става положителна, ако протеинът е по-голям от 3,3 mg%. Понякога се получава бял пръстен при наличие на големи количества урати. За разлика от протеиновия пръстен, уратният пръстен не се появява на границата между двете течности, но малко по-висок. Larionova предлага да се използва вместо 30% азотна киселина като реагент 1% разтвор на азотна киселина в наситен разтвор на натриев хлорид; Това осигурява големи икономии на азотна киселина.

Проба с железистозинодисти калий и оцетна киселина. Тази реакция прави възможно изолирането на серумните протеини от нуклеоалбумин.

В две епруветки се наливат равни количества урина. В един от тях се добавят няколко капки 30% разтвор на оцетна киселина. Ако се получи мътност в сравнение с контролната епруветка, урината съдържа нуклеоалбумин. Ако не се появи мътност, съдържанието на двете тръби се смесва и отново се разделя на две части. В една от двете епруветки се добавят няколко капки (излишъкът може да превърне положителната проба в отрицателна) от 10% разтвор на жълтата кръвна сол (калиев фероцианиден сироп). В присъствието на суроватъчни протеини се получава мътност.

С концентрирана урина, съдържаща големи количества пикочна киселина и урат, трябва да се направи проба с фери и сироп калий и оцетна киселина след предварително разреждане (2-3 пъти) на урината с вода. В противен случай може да се получи мътност, причинена от утаена пикочна киселина.

Това е особено важно при изследването на урината при кърмачета, която съдържа много пикочна киселина и урати.

От останалите качествени проби за протеини в урината, на базата на протеинови утаявания, те са намерили приложение: кипене, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia и др.

При производството на висококачествени проби за протеини в урината, основани на отлагането на протеини, е необходимо да се спазват следните общи правила, нарушението на които води до значителни грешки в изследването.

1. Урината, която ще се тества, трябва да бъде кисела. С алкална реакция урината се подкислява леко с оцетна киселина. Производството на проба с алкална урина в случаите, когато се използва киселина като реагент, може да доведе до неутрализация на киселината и до отрицателен резултат с положителна реакция. Това е особено вярно за теста на сулфосалициловата киселина, тъй като киселината се добавя в много малки количества и може лесно да се неутрализира.

2. Изследваната урина трябва да бъде прозрачна.

3. Пробите за установяване на протеин в урината трябва винаги да се правят в две тръби, едната от които служи за контрол. Без контролна тръба може да не се забелязва лека мътност по време на реакциите.

4. Количеството добавена киселина в пробите не трябва да бъде твърде голямо. Голямо количество киселина може да доведе до образуването на разтворим кисел албумин и до превръщането на положителна проба в отрицателна.

Поради простата си техника колориметричните сухи проби заслужават голямо внимание. Когато се използват тези проби, ефектът, който протеинът оказва върху цвета на индикатора в буферния разтвор (така наречените индикатори за белтъчна грешка). Филтърна хартия, напълнена с буфер от лимонена киселина и бромфенолово синьо като индикатор, се абсорбира в урината за кратко време. Пробата е положителна, ако стане синьо-зелен цвят. Сравнявайки интензивността на оцветяването със стандартите за цветна хартия, е възможно да се извлекат приблизително и количествени изводи. Индикаторната хартия се продава в опаковки със съответните цветови стандарти, като универсалната индикаторна хартия.

Методи за количествено определяне на протеини в урината
Предложени са много методи за количествено определяне на протеини в урината. Точните количествени методи за определяне на протеини в биологичния материал не се използват широко при определяне на протеина в урината, поради сложни и отнемащи време техники. Обемните методи са широко разпространени, особено методът на Есбах. Те са много прости, но, за съжаление, не са много точни. Методите на групата Брандберг-Столников, които дават по-точни резултати от обемните методи, с относително проста техника, също са удобни за клиниката. В присъствието на фотометър или нефелометър, нефелометричните методи също са удобни.

Метод Есбах. Той е предложен от парижкия лекар Есбах през 1874 г. Излейте урина и реагент в специална епруветка (албуминометър на Есбах). Тръбата се запечатва с гумена запушалка, старателно се разбърква (без да се бие!) И се оставя в изправено положение до следващия ден. Съобщете за разделението, което достига до колоната на белтъчната утайка. Намереният брой показва съдържанието на протеин. Много е важно с метода на Есбах урината да е кисела. Алкалната урина може да неутрализира киселинните съставки на реагента и да предотврати утаяването на протеини.

Предимства на метода: това е просто и удобно на практика.

Недостатъци: методът е неточен, резултатът се получава след 24 - 48 часа.

Метод Брандберг-Столников. Тя се основава на теста за качество на Geller. За количествено определяне може да се използва пробата на Гелер, тъй като тя дава положителен резултат с протеиново съдържание над 3,3 mg%. Това е крайната концентрация на протеин, под която пробата става отрицателна.

Модификация на Ерлих и Алтхаузен. Съветските учени С. Л. Ерлих и А. Я. Алтгаузен модифицират метода на Брандберг-Столников, като посочват възможностите за опростяване на научните изследвания и спестяване на време при неговото производство.

Първото опростяване е свързано с времето на поява на пръстена. Определя се точно времето на появата му, без да е необходимо да се спазва втората и третата минута.

Второто опростяване позволява да се установи какъв вид развъждане следва да се извършва. Авторите доказаха, че необходимото разреждане може да бъде приблизително установено от вида на получения пръстен. Те разграничават нишковидни, широки
и компактен пръстен.

От нефелометричните методи трябва да се отбележи методът Kingsberry и Clark. 2,5 ml филтрирана урина се излива в малък градуиран цилиндър, допълнен с 3% воден разтвор на сулфосалицилова киселина до 10 ml. Разбъркайте добре и след 5 минути фотометрирайте в 1 cm кювета с жълт филтър, като използвате вода като компенсационна течност. С фотометъра Pulfrich намерената екстинкция, умножена по 2.5, дава количеството протеин в% o. В случаите, когато индексът на екстинкция е по-висок от 1.0, урината се разрежда предварително 2 пъти, 4 пъти или дори повече.

За да има ясна представа за количеството протеини, които се екскретират в урината, е необходимо да се определи не само тяхната концентрация в отделна порция урина, но и тяхната обща дневна доза. За да направите това, вземете урината на пациента за 24 часа, измерете обема й в милилитри и определете концентрацията на протеин в част от дневната урина в g%. Количеството протеини, екскретирани в урината за 24 часа, се определя в зависимост от дневното количество урина в грамове.

Клиничното значение на протеина в урината

Човешката урина обикновено съдържа минимални количества протеин, които не могат да бъдат установени чрез обикновени качествени проби за тестване на протеини в урината. Екскрецията на големи количества протеин, в която обикновените висококачествени проби за протеини в урината стават положителни - необичайно явление, наречено протеинурия. Протеинурията е физиологична само при новороденото, през първите 4-10 дни след раждането. Името албуминурия, което често се използва, е погрешно, защото не само албуминът, но и други видове протеини (глобулини и др.) Се екскретират в урината.

Протеинурия, като диагностичен симптом, е открита през 1770 г. от Cotuno.

Най-важната функционална бъбречна протеинурия при деца е следната:

1. Физиологична протеинурия на новороденото. Той се среща при повечето новородени и няма неблагоприятно значение. Това се обяснява с незрели бъбречни филтри, увреждания при раждане или загуба на течности в първите дни от живота. Физиологичната протеинурия изчезва на 4-10-ия ден след раждането (по-късно при недоносени бебета). Количеството протеин е малко. Той е нуклеоалбумин.

Неонаталната албуминурия, която трае дълго време, може да бъде симптом на вродени сини.

2. Инсултна албуминурия. Те се причиняват от превишаване на прага на нормалната раздразнителност на бъбречния филтър чрез значителни механични, термични, химични, умствени и други раздразнения - загуба на течност при бебета (дехидратационна протеинурия), студено къпане, богата на протеини храна (алиментарна протеинурия), палпация на бъбреците (палпаторна албуминурия), физически претоварен, страх и т.н.

Инсултната албуминурия се появява по-лесно при деца на ранна възраст, отколкото при деца на по-възрастна възраст и при възрастни, тъй като бъбреците на бебето и малките деца са по-лесно раздразнени. Дехидратацията на албуминурията (нарушение на храненето, хидроличност, токсикоза, диария, повръщане) е особено често при кърмачета.

Инсултната албуминурия е доброкачествена. Те изчезват веднага след отстраняването на причините. В седиментите понякога се срещат левкоцити, цилиндри и червени кръвни клетки. Най-често протеинът е нуклеоалбумин.

3. Ортостатична протеинурия. Това състояние е характерно за деца от предучилищна и училищна възраст. Това се случва на базата на вазомоторни нарушения в кръвоснабдяването на бъбреците. Характерно за ортостатичната албуминурия (оттук и името му) е, че тя се появява само когато детето стои, когато гръбначният стълб е в лоботична позиция. В легнало положение тя изчезва. Нуклеоалбуминът се освобождава. При съмнителни случаи може да се прибегне до ортостатичен опит, който се състои в следното: вечер, един час преди лягане, детето изпразва пикочния мехур; сутрин, ставайки от леглото, той отново отделя урина. Тази урина не съдържа протеини. Тогава детето се поставя на колене за 15-30 минути с пръчка зад гърба си, между лактите на двете свити ръце. Той създава позиция на лордоза, която води до освобождаване на протеин, без промени в седимента.

С ортостатична албуминурия могат да се отделят 8-10 g протеин на ден.

Органичната бъбречна протеинурия е от основно клинично значение между всички протеинурии. Те се причиняват от органични бъбречни заболявания (нефрит, нефроза, нефросклероза). Протеинурията е един от най-важните и най-известни симптоми на органично бъбречно заболяване.

1. При остър и хроничен гломерулонефрит се среща редовно протеинурия. Количеството на протеина е умерено и няма паралел между степента на протеинурия и тежестта на заболяването. Обратно, хроничната и по-тежка нефрит често се срещат с по-малки количества протеин, отколкото остри. След остър нефрит, понякога дълго време (години), се установяват малки количества протеин в урината, които нямат патологично значение ("остатъчна албуминурия"). Не трябва да се забравя, че може да се появи и “нефрит без протеинурия”. Понякога протеин се намира в една част от урината, а в друга - не. Съотношението на албумин към глобулини при остър нефрит е ниско, а при хроничен нефрит е по-високо.

2. В случай на нефросклероза, количеството на протеините в урината е незначително, често се срещат формите на заболяването без протеин в урината.

3. От всички бъбречни заболявания, нефроза се проявява с най-изразената протеинурия.

4. При инфекциозни и токсични състояния се срещат т.нар. Фебрилна и токсична протеинурия. Това са остра нефроза, при която количеството на протеина е малко. Тази група включва и протеинурия в конвулсивни състояния (конвулсии), хипертиреоидизъм, жълтеница, инвагинации, ентероколити, изгаряния, тежка анемия и др. Тези албуминурии са доброкачествени и преминават бързо (преходна албуминурия).

5. Когато кръвта се задържа в бъбреците, се появява така наречената конгестивна албуминурия, която е характерна за сърдечносъдовите пациенти в стадия на декомпенсация. Намира се и при асцити и тумори на корема.

При фебрилна, токсична и застойна албуминурия повишената пропускливост на бъбречния филтър е особено изразена. Според някои автори, много от тези протеинурия се появяват без органични увреждания на бъбречния паренхим.

Екстрареналният албуминурия обикновено се причинява от протеинови примеси (секрети, разрушени клетки), които се секретират от болните пикочни пътища и половите органи. Често се открива екстрареална албуминурия, дължаща се на цистопилит (пиурия), по-рядко поради вулвовагинит, камъни и тумори на пикочните пътища.

При екстрареална албуминурия в седимента се открива голям брой левкоцити и бактерии. Бъбречните елементи почти никога не се срещат. Количеството протеин е малко. Филтрираната или центрофугираната урина обикновено не дава положителна протеинова проба.

При хора, които се възстановяват от пиелит, албуминурията изчезва след бактериурия и пиурия.

Трябва да се подчертае като характерен феномен, че в ранното детство органичните бъбречни заболявания са изключително редки, поради което органичната протеинурия също е рядка. От тях се срещат главно фебрилни и токсични. За разлика от органичната протеинурия, инсултната албуминурия е много честа при малки деца.

При по-големи деца органичната протеинурия е по-често функционална. Като цяло, с възрастта функционалната протеинурия е по-рядко срещана и органична по-често.

Електрофоретични изследвания на протеини в урината

Редица автори използват електрофоретичния метод за изследване на протеини в урината (уропротеини). От получената електрофореграма е ясно, че те имат същия качествен състав като плазмените протеини. Това показва, че протеините в урината произхождат от плазмени протеини.

Качествено и количествено определяне на белтъка в урината.

Нормални стойности: нормалният протеин в урината се съдържа в минимални количества, които не се откриват при обичайните качествени реакции. Горната граница на нормата на протеина в урината е 0,033 g / l. Ако съдържанието на протеин е по-високо от тази стойност, тогава висококачествените протеинови проби стават положителни.

Клиничното значение на дефиницията:

Появата на протеин в урината се нарича протеинурия. Протеинурията може да бъде фалшива и бъбречна. Екстрареналната протеинурия може да бъде в присъствието на примеси на протеинов произход от гениталните органи (вагинит, уретрит и др.), Докато количеството на протеина е незначително - до 0.01 g / l. Бъбречната протеинурия може да бъде функционална (при хипотермия, физическо натоварване, треска) и органична - с гломерулонефрит, пиелонефрит, нефрит, нефроза, бъбречна недостатъчност. При бъбречната протеинурия съдържанието на протеини може да бъде от 0,033 до 10-15 g / l, понякога по-високо.

Принципът на метода: се основава на факта, че протеините под действието на неорганични киселини се коагулират (стават видими). Степента на мътност зависи от количеството протеин.

Откриване на протеин в урината с 20% сулфосалицилова киселина.

Реактиви: 20% разтвор на сулфосалицилова киселина. Оборудване: тъмен фон.

1. Изисквания за урина: урината трябва да бъде кисела (или слабо кисела) рН, трябва да е прозрачна, за тази цел урината се центрофугира. Алкалната урина се подкислява до слабо кисела реакционна среда, като се използва индикаторна хартия за контрол.

2. В 2 епруветки с един и същ диаметър се налива 2 ml от приготвената урина. 1 епруветка - контрол, 2 - опит. Към епруветката се добавят 4 капки 20% сулфосалицилова киселина.

3. Резултатът се отбелязва на тъмен фон.

4. В присъствието на протеин урината в епруветката става мътна.

Висококачествено определяне на протеини в урината чрез тест-ленти.

За идентифициране на протеинурия се използват различни монотестни ивици: Албуфан, Албустикс, Биофан Е и политически тестове: Трискан, Нонафан и др.

Откриване на протеин в урината по метода на Робъртс - Столников.

Принципът на метода: се основава на факта, че протеините под действието на неорганични киселини се коагулират (стават видими). Степента на мътност зависи от количеството на протеина (т.е. тест на пръстена на Geller). Когато концентрацията на протеин в урината е 0,033 g / l, до края на 3 минути след наслояването на урината се появява тънка бяла нишка.

Реактиви: 50% разтвор на азотна киселина или реагент на Робъртс (98 части наситен разтвор на натриев хлорид и 2 части концентрирана солна киселина) или реагент на Ларион (98 части наситен разтвор на натриев хлорид и 2 части концентрирана азотна киселина).

Оборудване: тъмен фон.

1. Изисквания за урина: урината трябва да бъде кисела (или слабо кисела) рН, трябва да е прозрачна, за тази цел урината се центрофугира. Алкалната урина се подкислява до слабо кисела реакционна среда, като се използва индикаторна хартия за контрол.

2. Налейте 2 ml 50% разтвор на азотна киселина или един от реактивите в епруветка, след което внимателно изсипете същия обем от приготвената урина по стената на епруветката с пипета.

3. Пробата се оставя за 3 минути

4. След 3 минути докладвайте резултата. Резултатът се отбелязва на тъмен фон в предаваната светлина. Ако пръстенът е широк, компактен, тогава урината се разрежда с дестилирана вода и отново се нанася върху реактива.

5. Урината се разрежда, докато след 3 минути се образува тънък влакнест пръстен.

6. Изчисляването на съдържанието на протеин в урината се извършва по формулата:

С = 0.033 g / 1 х степен на разреждане.

194.48.155.245 © studopedia.ru не е автор на публикуваните материали. Но предоставя възможност за безплатно ползване. Има ли нарушение на авторските права? Пишете ни Свържете се с нас.

Деактивиране на adBlock!
и обновете страницата (F5)
много необходимо

Методическо развитие на практическите занятия "Определяне на протеин в урината" (1 курс)

Център за обучение на капитали
Москва

Тема: Определяне на протеини в урината.

Цел: Изследване на химичните свойства на урината.

Изследване на количествени и качествени методи за определяне на протеини в урината;

Научете основните принципи на работа с тест ленти на автоматични анализатори.

Вид на заетостта: практически (6 часа)

Студентът трябва да знае:

Качествени проби за определяне на протеини.

Метод на Робъртс - Столников.

Определяне на протеин 3% SSC.

Биуретов метод за определяне на протеини (THU).

Диагностичната стойност на изследователските показатели.

Студентът трябва да може:

Подгответе работно място за тестване на урината.

Подгответе реагенти, съдове и оборудване за изследването.

Да се ​​определят химичните свойства на урината (белтък в урината чрез качествени и количествени методи).

Работа с празни продукти (проектиране на формуляри за анализ).

Правилно интерпретиране на резултатите от проучването.

Средства за постигане на целта:

1. Работа с бележки, образователна и специална литература.

2. Подготовка за практическите упражнения с използване на методическите препоръки на учителя, изпълнението и изпълнението на практическата работа.

3. Работа с информационни средства за обучение в електронни и хартиени медии.

Оборудване за учебни и офис работни места:

места по броя на студентите;

работно място на учителя;

специализирани мебели и оборудване.

Инструменти за техническо обучение:

компютри за оборудването на работното място на учителя и учениците;

технически средства за аудиовизуално показване на информация;

аудиовизуални учебни помагала (презентация, видео обучение).

Резултатът от усвояването на урока е:

Формиране на практически професионални умения и първоначален практически опит, включително професионални (PC) и общи (QA) компетенции:

PC 1.1. Подгответе работно място за лабораторни клинични изпитвания.

PC 1.2. Да провежда лабораторни клинични изследвания на биологични материали.

PC 1.3. Запишете резултатите от изследването.

PC 1.4. Изхвърлете използвания материал, дезинфекцирайте и стерилизирайте използваната лабораторна стъклария, инструменти и предпазни средства.

ОК 1. Разберете естеството и социалната значимост на бъдещата им професия, покажете постоянен интерес към нея.

OK 2. Организирайте собствените си дейности, изберете стандартни методи и начини за изпълнение на професионални задачи, оценете тяхната ефективност и качество.

ОК 6. Работете в екип и екип, общувайте ефективно с колеги, ръководители, пациенти.

OK 9. Да се ​​ръководи в условията на промяна на технологията в професионалната дейност.

ОК 13. Да се ​​организира работно място в съответствие с изискванията за защита на труда, промишлена хигиена, инфекциозна и пожарна безопасност.

I модул. Теоретичната част с елементите на самостоятелната работа

Задача номер 1. Проучване и очертаване на учебния материал в работните книги.

Здравият човек обикновено съдържа по-малко от 0,002 g / l и рядко до 0,012 g / l протеин, и обикновено това съдържание на протеин в урината се нарича „под формата на следи“ и не се открива с конвенционални химически методи в здравата човешка урина.

Съдържанието на протеин на порции урина, събрани по различно време от деня, може да варира значително.

Протеинът в урината се нарича протеинурия.

В зависимост от дневната загуба на протеин се различават следните степени на протеинурия: умерена - до 1 g; среда - от 1 до 3 g; изразено - повече от 3 g.

Има два основни вида протеинурия:

Протеинурия, причинена от заболявания на пикочните пътища;

протеинурия, с лезии (заболявания) на бъбреците.

Протеинурия, свързана с възпалителни процеси на пикочните пътища, придружена от появата в урината на значителен брой левкоцити или еритроцити, което обаче не елиминира едновременното проникване на протеин в урината от бъбречния паренхим; Съдържанието на протеин рядко надвишава 1 g / l.

Бъбречната протеинурия в повечето случаи е свързана с повишена пропускливост на гломерулите и е разделена на 2 групи:

Към физиологичната протеинурия се отнасят случаи на временно появяване на протеин в урината, които не са свързани със заболявания:

след ядене на голямо количество храна, богата на не денатурирани протеини (сурово месо, сурови яйца);

с интензивна мускулна работа (дълги походи, спортни събития);

когато приемате студена баня или душ;

със силни емоционални преживявания;

с епилептични припадъци.

Различават ортостатични, или младежки, протеинурия, възникваща при деца и юноши и преминаващи с възрастта. В диференциално - диагностичната връзка е от практическо значение, че ортостатичната албуминурия често се среща в периода на възстановяване от остър гломерулонефрит.

Патологична бъбречна протеинурия може да бъде резултат от органични заболявания на бъбреците и други органи и системи: остър гломерулонефрит; хроничен гломерулонефрит; остър пиелонефрит; хроничен пиелонефрит; нефропатия при бременни жени; различни заболявания, свързани с треска; тежка хронична сърдечна недостатъчност; и леко бъбречно заболяване; липоидна нефроза; бъбречна туберкулоза; хеморагична треска; хеморагичен васкулит; тежка анемия; хипертония и др.

Задача номер 2. Препишете и начертайте диаграми на лабораторните методи за определяне на протеина в урината.

Лабораторни методи за определяне на протеин в урината

Съществуват качествени и количествени методи за определяне на протеини в урината, които се основават на коагулацията на протеина в обема на урината или на границата на средата (урина и киселина); При измерването на степента на коагулация пробата става количествена.

проба с 20% сулфосалицилова киселина (стандартизирана);

Тест на пръстена на Geller (в момента не се използва);

откриване на протеини с помощта на индикаторна хартия (ленти) и тест ленти.

единния метод на Брандберг-Робъртс-Столников;

с 3% сулфосалицилова киселина.

Качествени методи за определяне на протеин в урината

Задача номер 3. Определяне на протеин в урината с помощта на стандартизирана проба с 20% сулфосалицилова киселина

Принципът на метода: се основава на коагулацията на протеини в обема на урината или на границата на средата (урина и киселина)

Съдове, оборудване и реактиви:

20% сулфосалицилова киселина (2-хидрокси-5-сулфобензоена киселина С ₇ Н ₅ 0 ₆ S).

3 ml филтрирана урина

2 броя химически епруветки

Три епруветки с филтрирана урина се въвеждат в две епруветки, към една от тях се добавят 6-8 капки сулфосалицилова киселина (опит). На тъмен фон се сравняват двете тръби.

Тълкуване на резултатите:

Непрозрачността в епруветката показва наличието на протеин в урината - пробата е положителна.

Забележка. Алкалната урина се подкислява преди теста чрез добавяне на няколко капки 10% разтвор на оцетна киселина.

Задача номер 4. Определяне на протеини чрез тест на пръстена на Geller

Принципът на метода: Пробата от пръстена се основава на факта, че когато азотната киселина се добавя към урината на интерфейса (киселина - урина) в присъствието на протеин, тя се коагулира и се появява бял пръстен.

Съдове, оборудване и реактиви:

- реактиви: 30% разтвор на азотна киселина (HNO 3) (d = 1,2) или ларионна реакция: 20-30 g натриев хлорид (NaCl), разтворен в 100 ml дестилирана вода при нагряване, охлаждане, филтриране; Към 99 ml от филтрата се прибавя 1 ml концентрирана HN03.

В епруветката се налива 1 - 2 ml от 30% разтвор на HNO 3 или реагент на Ларионова и леко се наслоява същото количество филтрирана урина на стената.

Тълкуване на резултатите:

Появата на границата на две течности между 2-рата и 3-та минута на тънък бял пръстен показва наличието на протеин в урината.

Начертайте схема за определяне на протеина

Количествено определяне на протеини

Принципът на метода: Образецът на пръстена на Гелер се основава на факта, че когато азотната киселина се добавя към урината на интерфейса (киселина - урина) в присъствието на протеин, тя се коагулира и се появява бял пръстен.

Съдове, оборудване и реактиви:

Биологична течност (урина);

В епруветката се налива 1 - 2 ml от 30% разтвор на HNO 3 или реагент на Ларионова и леко се наслоява същото количество филтрирана урина на стената.

Тълкуване на резултатите:

Появата на границата на две течности между 2-ра и 3-та минута
тънък бял пръстен показва наличието на протеин в концентрация приблизително 0.033 g / 1. Ако пръстен се появи по-рано от 2 минути след ламинирането, урината трябва да се разреди с дестилирана вода и да се тества отново с разредена урина. Степента на разреждане на урината се избира в зависимост от вида на пръстена, неговата ширина, компактност и време на външен вид.

С нишкоподобен пръстен, който се появява по-рано 2 минути, урината се разрежда 2 пъти, с широк - 4 пъти, с компактен - 8 пъти и т.н. Концентрацията на протеина се изчислява чрез умножаване на разреждането с 0,033 g / l.

Белият пръстен може да се образува, когато има голям брой урати; За разлика от протеина, той изглежда малко над границата на две течности и се разтваря, когато е леко загрят.

Задача номер 6. Определяне на количеството протеин в урината с 3% сулфосалицилова киселина

Принципът на метода: Концентрацията на протеин в урината е пропорционална на мътността, която възниква, когато се коагулира сулфосалицилова киселина

Съдове, оборудване и реактиви:

0.9% разтвор на натриев хлорид;

1% стандартен разтвор на албумин - 1 g лиофилизиран албумин (от човешки или говежди серум) се разтваря в малко количество от 0,9% разтвор на NaCl в колба с вместимост 100 ml и след това се долива до марката със същия разтворител. Реагентът се стабилизира чрез добавяне на 1 ml 5% разтвор на натриев азид (NaN 3). Когато се съхранява в хладилник, реагентът е стабилен в продължение на 2 месеца.

1.25 ml филтрирана урина се въвежда в епруветка, прибавят се 3,75 ml 3% разтвор на сулфосалицилова киселина и се смесва. След 5 минути, пробата се фотометрира върху PEC при дължина на вълната 590–650 nm (оранжев или червен светлинен филтър) срещу контролата в кювета с дължина на оптичния път 5 mm. Контролът служи като проба, в която се прибавят 3,75 ml 0,9% разтвор на натриев хлорид към 1,25 ml урина. Концентрацията на протеина се изчислява по калибрационна графика, за изграждането на която се приготвят разреждания на стандартен разтвор на албумин. (виж таблицата). От всеки разреден получен разтвор се вземат 1,25 ml и се третират като експериментални проби.

Приготвяне на разреждания за калибриране на графиката

Стандартен разтвор, ml

0.9% разтвор на натриев хлорид, ml

Концентрация на протеин, g / l

Праволинейната зависимост на величината на екстинкцията и концентрацията на протеини се поддържа до 1 g / l. При по-високи концентрации на протеин пробата трябва да бъде разредена и да се вземе предвид разреждането в изчислението.

Ако в урината има вещества, съдържащи йод, могат да се получат фалшиво положителни резултати. Следователно, тестът не може да се използва при пациенти, приемащи йодни препарати или които са били подложени на изследвания с използване на радиоактивни съединения, съдържащи йод. Фалшиво позитивни J реакции по време на проучването могат да бъдат причинени от приема на сулфаниламидни лекарства, големи дози пеницилин и при високи концентрации в урината на пикочната киселина.

Начертайте схема за определяне на протеина

Задача номер 7. Откриване на Бен-Джоунс в урината

Принципът на метода: на базата на реакционното термопреципитация

Съдове, оборудване и реактиви:

Реагент: 2М ацетатен буфер рН 4.9.

4 ml от филтрираната урина се смесва с 1 ml буферен разтвор и се загрява в продължение на 15 минути на водна баня при 56 ° С.

Тълкуване на резултатите:

При наличието на белтък Bens-Jones в урината, през първите 2 минути се появява изразена утайка.

Когато концентрацията на протеина е по-малка от 3 g / l, пробата може да бъде отрицателна, което е доста рядко, тъй като обикновено концентрацията на протеина Bens-Jones в урината е много значима.

Най-надеждно откриване на протеина Bens-Jones е чрез утаяване при температура 40-60 ° С. Въпреки това, при твърде кисела (рН по-малка от 3,0) или твърде алкална (рН повече от 6,5) урина, с ниска относителна плътност на урината и ниска концентрация на Bens-Jones бежово (по-малко от 3 g / l), седиментацията може да не настъпи.

Начертайте схема за определяне на протеина

II модул. Независима работа с изследователския етап

Задача номер 1. Проучване и очертаване на приложение №1 "Откриване на протеин с помощта на диагностични тест ленти"

- Получаване на проби от биологична течност (урина) от учителя, броят на пробите;

- Проведете тест на урината с помощта на диагностични тест ленти;

- Оценете резултата (норма, патология). Да предположим причината за протеина в урината.

- Напишете резултата в формулярите за анализ, предайте ги на учителя.

"Откриване на протеин с помощта на диагностични тест ленти"

Принцип. Протеинът променя цвета на индикатора, приложен към лентата. Индикаторите са опаковани в комплект от 100 ленти, които се съхраняват в плътно затворен калъф, на хладно и сухо място.

Правила за работа с диагностични тест ленти

Когато работите с диагностични тест ленти, трябва да спазвате следните правила:

- да съхраняват диагностичните тест ленти в плътно затворени опаковки;

- да се съхраняват на тъмно, сухо и хладно място при температура не по-висока от 30ºС, но не и в хладилник;

- Не излагайте ленти на влага и директна слънчева светлина, високотемпературни и летливи химикали;

- получавате само строго необходимия брой ленти, след което незабавно затваряйте кутията;

- Не докосвайте диагностичните зони с пръсти.

Правила за тестване

1. За изследването използвайте утринна урина, събрана в пластмасов контейнер за урина (или чисти сухи съдове). Смесете доставената урина, но не центрофугирайте.

Когато се използва нестандартно коригирано опаковане, остатъците от детергент в контейнера за събиране на урина предизвикват неверни резултати.

2. От калъфа за моливи вземете тест лента.

3. Незабавно затворете кутията с капака на завода, защитете лентата от влага.

4. Спуснете индикаторните лентички за 2-3 секунди в изследваната урина и незабавно ги отстранете.

5. За да се отстрани излишната влага от диагностичните зони на лентата, да се изпълни с дълъг край по ръба на контейнера (или друг контейнер, в който се доставя урина) или да се прикрепи този ръб на лентата към филтърна хартия.

Невъзможно е да се измие излишната урина от диагностичните зони.

6. След изтичане на срока, посочен на етикета на резервоара или в инструкциите за всяко изпитване, се сравнява цветът на съответната диагностична зона с цветната скала върху етикета на контейнера с ивици (стандартни). Процедурата за изпитване е показана на фигури 1-7.

7. Реакцията се оценява като положителна или отрицателна. Или изразена числено в g / l. (виж чертеж №8).